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http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AYYHDC
Tipo: | Tese de Doutorado |
Título: | Influência da Salmonella Enterica Sorovar Typhimurium sobre a virulência da Entamoeba Dispar e da Entamoeba Histolytica in vitro e na colite amebiana experimental |
Autor(es): | Fabrício Marcus Silva Oliveira |
primer Tutor: | Marcelo Vidigal Caliari |
primer Co-tutor: | Maria Aparecida Gomes |
primer miembro del tribunal : | Marta de Lana |
Segundo miembro del tribunal: | Silvia Dantas Cangussú |
Tercer miembro del tribunal: | Adriana Oliveira Costa |
Cuarto miembro del tribunal: | Wanderson Geraldo de Lima |
Resumen: | A amebíase é a protozoose mais grave que atinge o ser humano e a segunda maior causa de morte entre as doenças parasitárias, superada apenas pela malária. Considera-se que apenas a Entamoeba histolytica é capaz de penetrar nos tecidos e produzir amebíase invasiva. Contudo, alguns estudos têm demonstrado que a Entamoeba dispar é capaz de produzir lesões em modelos experimentais. Com o objetivo de determinar se as bactérias enteropatogênicas contribuem para aumentar a expressão gênica dos fatores de virulência amebianos, bem como de induzir lesões mais intensas, propusemos avaliar a influência da bactéria Salmonella enterica sorovar Typhimurium sobre a virulência da Entamoeba dispar e da Entamoeba histolytica em trofozoítos isolados da cultura in vitro e avaliar patologicamente a colite amebiana, em ratos infectados com trofozoítos amebianos e co-infectados com S. Typhimurium. As cepas MCR, ADO e VEJ de E. dispar e, EGGp e EGGa de E. histolytica foram cultivadas separadamente e, associadas ou não à bactéria S. Typhimurium. Em seguida foi realizada a extração do RNA dessas culturas para produção de cDNA dos fatores de virulência de E. histolytica e E.dispar e quantificada a expressão dos fatores de virulência. Para a indução de colite amebiana, 8 ratos wistar (Rattus norvegicus) por grupo, previamente submetidos a uma intubação intragástrica da S. Typhimurium, foram inoculados pela via intracecal com 5x105 trofozoítos. Como grupos controles, 40 ratos foram somente inoculados com trofozoítos amebianos das cepas de Entamoeba estudadas. Outros 16 ratos constituíram os grupos controles somente infectados com S. Typhimurium e controle não infectado. Todos os ratos foram sacrificados 7 dias após a infecção amebiana para a coleta do ceco, confecção de lâminas histológicas para análise histopatológica e morfométrica e, para a realização de reações imuno-histoquímicas anti IL-1á, IL4, COX-2 e MUC-2. Nosso estudo permitiu observar que a co-cultura de E. dispar com a enterobactéria S. Typhimurium foi capaz de aumentar a expressão dos fatores de virulência amebianos amebaporo A, cisteína proteinase-5 e lectina ligante de Galactose e N-Acetilgalactosamina. Ao contrário do observado por outros autores, as cepas de E. dispar por nós estudados foram capazes de expressar o fator de virulência amebiano cisteína proteinase-5. A co-cultura de E. histolytica com a enterobactéria S. Typhimurium foi capaz de aumentar a expressão do fator de virulência amebiano amebaporo A. Também verificamos que na maioria dos grupos analisados, a associação in vivo da E. dispar ou da E. histolytica com a S. Typhimurium foi capaz de aumentar a intensidade da colite amebiana ulcerativa, também acompanhada pelo aumento da expressão de mediadores pró-inflamatórios e da redução da expressão de IL-4. Além disso, na maioria dos grupos analisados, a associação in vivo da E. dispar ou da E. histolytica com a S. Typhimurium foi capaz de aumentar a expressão da mucina MUC2, em virtude da maior intensidade da agressão à mucosa colônica. Diante dos resultados obtidos, concluímos que a interação da S. Typhimurium com a E. dispar e a E. histolytica foi capaz aumentar a virulência destas espécies de amebas levando à colite ulcerativa amebiana de maior intensidade. |
Abstract: | Amebiasis is the most serious protozoa that hits the human intestine and is the second-leading cause of death among parasitic diseases, surpassed only by malaria. It is considered that only Entamoeba histolytica is able to penetrate tissues and produce invasive amebiasis. However, some studies have shown that Entamoeba dispar is capable of producing lesions in experimental models. In order to determine if the enteropathogenic bacteria contribute to increase the gene expression of amebic virulence factors, as well as to induce more intense lesions, we propose to evaluate the influence of Salmonella Enterica sorovar Typhimurium on the virulence of Entamoeba dispar and Entamoeba histolytica in trophozoites isolated from the in vitro culture and pathologically evaluate amoebic colitis in rats infected with amoebic trophozoites and co-infected with S. typhimurium. E. dispar, MCR, ADO and VEJ strains from E. dispar and, EGGp and EGGa from E. histolytica were cultured separately and associated or not with the S. Typhimurium bacterium. Then, the RNA extraction from these cultures was carried out to produce cDNA from the virulence factors of E. histolytica and E.dispar and quantified the expression of the virulence factors. For the induction of amoebic colitis, 8 wistar rats (Rattus norvegicus) per group, previously submitted to an intragastric intubation of S. Typhimurium, were inoculated by the intracecal route with 5x105 trophozoites. As control groups, 40 rats were only inoculated with amebian trophozoites from the Entamoeba strains studied. Another 16 rats were the control groups infected only with S. typhimurium and uninfected control. All rats were sacrificed 7 days after amebic infection to collect cecum, histological slides for histopathological and morphometric analysis, and for the immunohistochemical anti-IL1á, IL4, COX-2 and MUC-2 immunohistochemical reactions . Our study showed that the co-culture of E. dispar with the S. typhimurium enterobacterium was able to increase the expression of amebaporo A, cysteine proteinase-5 and Galactose-binding lectin and N-acetylgalactosamine virulence factors. Contrary to what was observed by other authors, E. dispar strains studied by us were able to express the amoebic virulence factor cysteine proteinase-5. The co-culture of E. histolytica with the S. typhimurium enterobacterium was able to increase the expression of the amebian virulence factor amebaporo A. We also found that in the majority of the groups analyzed, the in vivo association of E. dispar or E. histolytica with S. typhimurium was able to increase the intensity of ulcerative amebic colitis, also accompanied by increased expression of proinflammatory mediators and reduced IL-4 expression. In addition, in most of the analyzed groups, the in vivo association of E. dispar or E. histolytica with S. typhimurium was able to increase MUC-2 mucin expression, due to the greater intensity of aggression to the colonic mucosa. In view of the results obtained, we conclude that the interaction of S. Typhimurium with E. dispar and E. histolytica was able to increase the virulence of these species of amoebae leading to ulcerative amebic colitis of greater intensity. |
Asunto: | Entamoeba Histolytica Fatores de virulência Medicina Entamoeba Salmonella typhimurium |
Idioma: | Português |
Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Sigla da Institución: | UFMG |
Tipo de acceso: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AYYHDC |
Fecha del documento: | 13-dic-2016 |
Aparece en las colecciones: | Teses de Doutorado |
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