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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8DHL6G| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Análise do comportamento de cementoblastos de ratos em contato com o produto iônico da dissolução de vidros bioativos |
| Authors: | Sandhra Maria de Carvalho |
| First Advisor: | Marivalda de Magalhaes Pereira |
| First Referee: | Herman Sander Mansur |
| Second Referee: | Patricia Valerio |
| Third Referee: | Lorenza Carvalhaes Machado de Souza |
| Abstract: | O cemento é um tecido mineralizado que recobre toda a superfície da raiz do elemento dentário e possui muitas similaridades com o tecido ósseo. O cemento é essencial para regeneração das estruturas que compõem o tecido periodontal, entretanto detalhes sobre a proliferação e diferenciação do seu tipo celular, os cementoblastos, ainda continuam obscuros. O objetivo desse estudo foi primeiro isolar e caracterizar biomolecularmente cementoblastos derivados de dentes de ratos para em uma segunda etapa realizar testes com o produto iônico da dissolução de vidro bioativo com 60% de sílica nano e microparticulado visando à criação de um modelo de regeneração do cemento. Recentes estudos têm demonstrado novos possíveis marcadores de cemento, a proteína de ligação do cemento (CAP), a proteína derivada do cemento (CP-23) e o gene F-Spondin. Nesse estudo foi hipotetizado que um gene embrionário chamado F-Spondin é um possível marcador de cementoblastos e através da análise por RT-PCR qualitativo foi demonstrada a sua expressão nas três populações de células denominadas de células da terceira digestão (3CD), células da quarta digestão (4CD) e células da quinta digestão (5CD) isoladas de raiz de molares de ratos adultos machos. A expressão de F-Spondin foi confirmada por ensaios de Western Blot e imunofluorescência utilizando anticorpos específicos para F-Spondin nas três populações. Foi verificada também a expressão de colágeno tipo I (COL I), sialoproteína óssea (BSP), osteocalcina (OC) e fosfatase alcalina (ALP) através de RT-PCR qualitativo nas populações 3CD, 4CD e 5CD. Fibroblastos gengivais quando comparados com as três populações não expressaram F-Spondin. Após a caracterização celular, foram avaliados os efeitos do produto iônico de vidro bioativo microparticulado ou nanoparticulado quando em contato com as populações celulares. Na análise da viabilidade celular por ensaio de Azul de Trypan, as populações celulares apresentaram um aumento de aproximadamente 24% quando em contato com o vidro bioativo nanoparticulado e de 10% quando em contato com o vidro bioativo microparticulado quando comparadas com o grupo controle. Houve também um aumento significativo da viabilidade celular avaliada pelo ensaio de MTT, de aproximadamente 94% das populações celulares tratadas com Nanovidro bioativo e 24% nas tratadas com Microvidro bioativo em relação ao grupo controle. A proliferação e viabilidade celulares foram confirmadas pelo ensaio de BrdU que demonstrou um aumento de aproximadamente 51% nas células tratadas com Nano e de 14% nas tratadas com Microvidro bioativo em comparação com o grupo controle. Esses resultados sugerem que é possível estabelecer uma cultura celular primária a partir de células de raízes dentárias de molares de ratos adultos e que F-Spondin pode ser um possível marcador de cementoblastos. Além disso, o efeito observado das nanopartículas de vidro bioativo sobre os cementoblastos demonstra ser uma interessante alternativa para ser usada em projetos futuros de membranas compósitas visando à regeneração tecidual do cemento dentário. |
| Abstract: | Cementum is a mineralized tissue that covers the surface of the tooth root and has many similarities with bone tissue. Cementum is essential for periodontal tissue regeneration, however details on the proliferation and differentiation of its cell type, cementoblasts, are still unclear. The aim of this study was to isolate and characterize cementoblasts derivedfrom rat teeth and to evaluate the response of these cells to the ionic products from the dissolution of bioactive glass with 60% silica. In this study it was hypothesized that an embryonic gene called F-Spondin is a possible marker of cementoblasts. It´s expression was demonstrated through analysis by qualitative RT-PCR in three populations called cellsof the third digestion (3CD), cells of the fourth digestion (4CD) and cells of the fifth digestion (5CD) isolated from the roots of molars of adult male rats. The expression of FSpondin was confirmed by Western blot assays and immunofluorescence using antibodies specific for F-Spondin. It was also demonstrated the expression of collagen type I (COL I), bone sialoprotein (BSP), osteocalcin (OCN) and alkaline phosphatase (ALP) by qualitative RT-PCR in populations 3CD, 4CD and 5CD. Gingival fibroblasts when compared with these three populations did not express F-Spondin. After cell characterization, we evaluated the effects of the ionic products of bioactive glass in contact with the cell populations. In the cell viability analysis by Trypan blue and MTT assays cell populationsshowed an increase in cell viability in contact with the ionic products from bioactive glass dissolution compared with the control group. The increased proliferation and cell viability was confirmed by BrdU assay. These results suggest that it is possible to establish a primary cell culture from molar tooth roots of adult rats and that F-Spondin is a possible marker for cementoblasts. Moreover, the observed effect of bioactive glass on cementoblasts shows that this material is an interesting alternative to be used in future projects for cementum regeneration trough tissue engineering. |
| Subject: | Engenharia metalúrgica Engenharia de minas Ciencia dos materiais |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8DHL6G |
| Issue Date: | 22-Feb-2010 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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