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Type: Dissertação de Mestrado
Title: Determinação da taxa de infecção por Leishmania (Leishmania) chagasi utilizando técnicas sorológicas e diagnóstico molecular quantitativo em crianças residentes em área urbana de expansão da Leishmaniose Visceral
Authors: Leticia Helena dos Santos Marques
First Advisor: Mariangela Carneiro
First Co-advisor: Elizabeth Castro Moreno
First Referee: Helida Monteiro de Andrade
Second Referee: Luciana Inacia Gomes
Abstract: A leishmaniose visceral (LV) no Brasil tem sido considerada atualmente um grave e emergente problema de Saúde Pública em áreas urbanas de grandes capitais. Nesse sentido, o diagnóstico da infecção assintomática por Leishmania (Leishmania) chagasi em uma dada população pode ser considerado um indicador para o delineamento e a avaliação dos programas de controle. Entretanto, inquéritos epidemiológicos baseados apenas em sorologiatêm mostrado limitações no diagnóstico de assintomáticos. Nesse estudo, procurou-se traçar um perfil mais verdadeiro da situação da LV humana na região Noroeste de Belo Horizonte MG. Para isso, avaliou-se a taxa de infecção por L. chagasi em 1875 crianças com idade entre 3 meses e 7 anos por meio de inquérito sorológico e por exame molecular quantitativo . Após coleta das amostras de sangue em papel filtro foi realizado ensaio ELISA com antígeno bruto (ELISA-AgT) de L. chagasi e com antígeno recombinante rK39 (ELISA-rk39). As amostras com resultado positivo em pelo menos um dessestestes (n=317) foram submetidas ao diagnóstico molecular por meio da PCR quantitativa em tempo real (qPCR), utilizando como alvo o gene SSU rRNA. Também foram selecionadas aleatoriamente 242 amostras negativas na triagem sorológica para avaliação por meio da qPCR. A taxa de infecção considerando as amostras positivas em pelo menos um dos ensaios sorológicos foi de 16,9%. Considerando o ELISA-AgT, a taxa de infecção foi de 2,8% e segundo o ELISA-rk39 essa taxa foi de 14,9%. A estimativa de prevalência da infecção baseada na qPCR foi de 13,9%. Ao associar todos os testes verificamos um aumento de sensibilidade e a taxa de infecção atingiu 30,8%. Foi possível estimar a carga parasitária das crianças diagnosticadas positivamente pela qPCR. A média dos níveis de parasitemia encontrados entre os indivíduos assintomáticos foi de 56,5 parasitos/mL de sangue (valornormalizado por nanograma de DNA extraído). Não foi observada diferença estatística para as variáveis sexo e idade das crianças, quando relacionadas aos resultados dos testes diagnósticos. Embora as técnicas utilizadas tenham apresentado baixa concordância, os resultados obtidos indicaram a presença de infecção assintomática por L. chagasi na regional noroeste de BH. Além disso, sugerem que a associação de mais de uma técnica diagnóstica pode ser considerada uma alternativa para realizar levantamento de indivíduos assintomáticos em área endêmica e permitir melhor avaliação e elaboração de medidas de controle mais efetivas.
Abstract: Nowadays, visceral leishmaniasis (VL) in Brazil has been regarded as a serious and emerging problem concerning Public Health for urban areas in major capitals. In that sense, asymptomatic infection diagnosis by Leishmania (Leishmania) chagasi in a given population can be considered as an indicator for outlining and assessing controlprogrammes. Nonetheless, epidemiologic inquiries based only on serology have shown limitations in asymptomatic diagnosis. In this study, tracing a profile which is more realistic about the situation of human VL in the Northwestern region of Belo Horizonte Minas Gerais, was looked for. In this context, infection rate by L. chagasi in 1875 children between 3 months and 7 years old was assessed by means of serologicinquiry as well as molecular examinations. After blood sample swab in filter paper, ELISA experiment with L. chagasi raw antigen (ELISA-AgT) and recombinant antigen rK39 (ELISA-rk39) was carried out. Positive resulting samples in at least one of those experiments (n=317) underwent molecular diagnosis by means of quantitative real timePCR (qPCR), using its gene SSU rRNA as a goal. Randomly, 242 negative samples were also selected for serologic classification so as to be assessed by qPCR. Considering positive samples in at least one of the serologic experiments, the infection rate was 16.9%. Regarding ELISA-AgT, infection rate was 2.8%, and according to ELISA-rk39, this same rate was 14.9%. Infection estimated prevalence based on qPCRwas 13.9%. When associating all these experiments, it can be verified a sensibility increase, and infection rate was up to 30.8%. It was possible to estimate parasitic burden in children diagnosed positively by qPCR. The average of parasitemia levels found between asymptomatic individuals was 56.5 parasites/blood mL (a normalised amount by extracted DNA nanogram). It was not observed any statistical difference for children sex and age variables when related to the results of diagnosis experiments. Results got showed the presence of asymptomatic infection by L. chagasi in the Northwestern region of Belo Horizonte. In addition, it is suggested that the association of more than one diagnosis technique can be considered as an alternative to carry outthe surveying of asymptomatic individuals in endemic area and that it also makes possible a better assessment and development of control measures which are more effective.
Subject: Parasitologia
Sorodiagnostico
Leishmaniose visceral Diagnóstico
Doenças parasitárias
Doenças transmissíveis
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8EMK99
Issue Date: 7-Dec-2010
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