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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8U4JJC| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Identificação de genes diferencialmente expressos em células endoteliais obtidas pela diferenciação de células-tronco derivadas do tecido adiposo humano |
| Authors: | Naira Roque Electo de Paiva |
| First Advisor: | Alfredo Miranda de Goes |
| First Referee: | Ana Lucia Brunialti Godard |
| Second Referee: | Maria Raquel Santos Carvalho |
| Abstract: | Há alguns anos, células.tronco foram obtidas de embriões e fetos humanos,dando início a uma nova era na área da biologia do desenvolvimento e suas possíveis aplicações médicas. Desde então, diferentes estratégias para se obter células.tronco foram descritas e, dentre estas, o isolamento de human&Adipose& Stem& Cell (hASC);asquais possuem a capacidade de se diferenciarem em várias linhagens mesenquimais,tais como células endoteliais.Contudo, ainda que algumas análises fenotípicas sejam utilizadas para comprovar tal diferenciação, para que a aplicação da terapia celular seja mais segura e eficaz, os processos genéticos que envolvem a diferenciação de células- tronco em determinadas linhagens celulares ainda não estão completamente elucidados no que se refere à expressão gênica diferencial. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi o de identificar genes diferencialmente expressos em hASC induzidas àdiferenciação# endotelial.Para tanto, as células-tronco foram extraídas de produto de lipoaspirado,processadas e avaliadas por Citometria de Fluxo e por Ensaio de Fosfatas eAlcalina.Para indução à diferenciação endotelial,VEGF e bFGF, foram adicionados ao meio de cultivo e após 14 dias, análises fenotípicas foram realizadas através de Ensaio de Fosfatas eAlcalina,Citometria deFluxo e MicroscopiaConfocal.Para a identificação de genes diferencialmente expressos nas células induzidas à diferenciação, foi utilizada a técnica de Rapid& Subtractive& Hybridization& (RaSH) e posterior identificação dos genes através de seqüenciamento e validação por PCR em Tempo Real. Os resultados obtidos comprovaram o isolamento de células-tronco derivadas do tecido adiposo e a diferenciação endotelial após indução. Através da utilização da técnica de RaSH foram identificados 5 genes (ELAVL1,LAMB2,SC5DL, HARS e VEGFA), dos quais foram validados VEGFA e HARS, através de PCR em Tempo Real,com expressão de1,5 e1,78 vezesmaior doque na célula indiferenciada,respectivamente. |
| Abstract: | Stem cells were obtained from embryos and human fetuses for the first time a few years ago, giving rise to a new era in the area of development biology and its possiblemedical applications.Different strategies have been thenceforth described to obtain stem cells, among which isolation of the human&Adipose&Stem&Cell (hASC) stands out, as these have the capacity to differentiate into several mesenchymal strains, suchas endothelial cells.Nevertheless,although some phenotypic analyses can be used to prove such differentiation, in order for cellular therapy application to be safer and more efficient, genetic processes that involve stem cell differentiation into determined cellular strains still need to be completely elucidated,especially regarding differential gene expression.In this context,the objective of!this work was to identify differentially expressed genes in hASC induced! to endothelial differentiation. Stem cells were therefore extracted! from lipoaspired product, processed and evaluated by Flow Cytometry and Alkaline Phosphatase Assay. Following, VEGF and bFGF were!added to the culture medium for induction of endothelial differentiation and after 14 days, phenotypic analyses were realized through the Alkaline Phosphatase Assay, Flow Cytometry and Confocal Microscopy. In order to identify differentially expressed genes in the! cells! induced! for! differentiation,! Rapid& Subtractive& Hybridization& (RaSH) technique and posterior gene identification through sequencing and Real Time PCR were performed.The obtained results confirmed isolation of stem cells derived from the adipose tissue and endothelial differentiation after induction. Using the RaSH technique, 5 genes (ELAVL1, LAMB2, SC5DL,HARS e VEGFA)!were identified, of which VEGFA and HARS were validated through Real Time PCR with 1,5 and 1,78 times higher expression, respectively, hen compared to undifferentiated cells. |
| Subject: | Células tronco Tecido adiposo Células epiteliais Genética Células Diferenciação Expressão gênica |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8U4JJC |
| Issue Date: | 19-Aug-2011 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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