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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8UJM5F| Tipo: | Tese de Doutorado |
| Título: | Análise da Microbiota Intestinal de ratos, antes e após da retirada da Valva Ileocecal e restabelecimento do trânsito com criação de "Esfíncter Artificial" |
| Autor(es): | Angela Aparecida Barra |
| Primeiro Orientador: | Alcino Lazaro da Silva |
| Primeiro membro da banca : | Maria de Lourdes Pessoli Biondo Simões |
| Segundo membro da banca: | José Eduardo Ferreira Manso |
| Terceiro membro da banca: | Denis Pajecki |
| Resumo: | Várias técnicas têm sido empregadas para a criação de esfíncteres artificiais no intestino para controle da velocidade do trânsito intestinal e prevenção de refluxo coloileal. A realização de seromiotomias duplas circunferenciais para substituir a valva ileocecal foi realizada por Rena et al. em 20 pacientes e mostrou resultados 5 clínicos satisfatórios. A proposta deste trabalho experimental é analisar, por meio de biologia molecular, a diversidade microbiota da região do íleo terminal e do colo proximal de ratos antes e depois da ressecção da válvula ileocecal com a reconstrução do trânsito com anastomose ileocólica término-terminal isolada ou associada à criação de esfíncter artificial pela técnica de Rena. Quatorze ratos foram 10 operados e colhidos conteúdo do íleo e do colo processadas como amostras controle. Após a ressecção da junção ileocecocólica, o trânsito foi reconstruído com anastomose ileocólica término-terminal. Em sete animais acrescentou-se a criação um esfíncter artificial a montante da anastomose. Os animais foram assistidos por 20 dias e reoperados para colheita de conteúdo intraluminar do íleo e do colo e 15 processamento de novas amostras. Das amostras foi extraído o ácido desoxirribonucléico (DNA) para Reação em Cadeia da Polimerase e Eletroforese em Gel com Gradiente de Desnaturação (PCR-DGGE). O gel com os padrões de bandas eletroforéticas geradas das amostras de DNA de bactérias totais foram submetidos ao programa BIONUMERICS para análise da similaridade pelo 20 coeficiente de Dice e da diversidade da microbiota pelo Índice de Shannon-Weaver. O dendograma do coeficiente de Dice de todas as amostras não estabeleceu correlação para segmentos ileais ou colônicos e as amostras-controle dos respectivos animais. Os valores do índice de Shannon-Weaver ficou limitado entre 2,11 e 2,93, com variações para os diversos segmentos nos dois grupos. A média 25 deste índice foi maior no segmento ileal (2,61) e do colo (2,57) dos animais com a criação do esfíncter artificial e do colo (2,63) nos animais sem criação de esfíncter artificial em relação à amostra controle (2,38, 2,39 e 2,36, respectivamente). Um número maior de amostras ileais apresentou valores mais elevados comparativamente com amostras do colo a despeito do fato de a concentração 30 microbiana ser descrita e considerada maior no colo. A ausência da junção ileocecal influenciou as variações da diversidade em todos os segmentos. Com a criação de novo esfíncter a diversidade aumentou nos segmentos tanto ileal quanto do colo. As variações encontradas podem se justificar em função de o comportamento da distribuição da microbiota no trato digestório ter características peculiares e receber influência de fatores locais e sistêmicos determinando a continuidade do presente estudo em relação à quantificação e especificidade de bactérias. |
| Abstract: | Several techniques have been employed for the creation of artificial bowel sphincters to control the speed of intestinal transit and prevent coloileal reflux. Dual circumferential seromyotomy to replace the ileocecal valve was performed by Rena at al. in 20 patients and showed satisfactory clinical results. The purpose of this 5 experimental work is to analyze, through molecular biology, the microbial diversity in the terminal ileum and proximal colon of rats before and after resection of the ileocecal valve. Then, the reconstruction of end to end ileocolic anastomosis was conducted in one group while an artificial sphincter was added in the other group, using the technique developed by Rena. Fourteen rats were operated and samples of 10 their ileum and colon contents were collected and processed as controls. After resection of the ileocecocolic junction, transit was reconstructed by end to end ileocolic anastomosis. In seven animals, an artificial sphincter was created upstream of the anastomosis. The animals were monitored for 20 days and reoperated to allow the collection of intraluminal content of the ileum and colon and processing of new 15 samples. Deoxyribonucleic Acid (DNA) was extracted from the samples for Polymerase Chain Reaction and Gel Electrophoresis with Denaturing Gradient PCR-DGGE. The electrophoretic band patterns generated from DNA samples of total bacteria were submitted to the BIONUMERICS software system for similarity analysis using "Dice" coefficient and diversity analysis of the microbiota by Shannon-Weaver 20 Index. The dendrogram generated from the "Dice" coefficient of all samples did not establish a correlation for ileal or colonic segments and samples of the respective control animals. The values of the Shannon-Weaver index was limited to between 2.11 and 2.93, with variations for different segments in both groups. The average of the index was higher in the ileum segment (2.61) and colon (2.57) in animals with an 25 artificial sphincter and in the colon (2.63) in animals without an artificial sphincter, compared to the control sample (2.38, 2.39 and 2.36, respectively). A larger amount of samples showed higher diversity values compared with colon samples, although microbial concentration is described and considered to be greater in the colon. The absence of the ileocecal junction affected diversity changes in all segments. With the 30 creation of a new sphincter, diversity increased in both segments (ileum and colon). The observed variations can be explained by the peculiar characteristics of the distribution behavior of the microflora in the digestive tract and the effect of local and systemic factors, which requires the continuity of this study focusing on quantification and specificity of bacteria. |
| Assunto: | Canal anal/cirurgia Pr Incontinência fecal/cirurgia Modelos animais Ratos Intestinos/anatomia & histologia Eletroforese em gel de gradiente desnaturante Intestinos Cirurgia Valva ileocecal /cirurgia Reação em cadeia da polimerase Reto/cirurgia |
| Idioma: | Português |
| Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Sigla da Instituição: | UFMG |
| Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8UJM5F |
| Data do documento: | 26-Mar-2012 |
| Aparece nas coleções: | Teses de Doutorado |
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