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Type: Dissertação de Mestrado
Title: Impacto da desnutrição sobre o metabolismo e o desenvolvimento de alterações histopatológicas no intestino delgado de Gerbils (Meriones unguiculatus) experimentalmente infectados com Giardia lamblia
Authors: Luciana Laranjo Amorim Ventura
First Advisor: Maria Aparecida Gomes
First Co-advisor: Marcelo Vidigal Caliari
metadata.dc.contributor.advisor-co2: Dirce Ribeiro de Oliveira
First Referee: Marcia Regina Fantoni Torres
Second Referee: Valbert Nascimento Cardoso
Abstract: A giardíase, infecção intestinal ocasionada pela Giardia lamblia, é uma importante causa de diarréia e má absorção intestinal. Diversos estudos já avaliaram a influência desta doença no estado nutricional. Contudo, o impacto da giardíase em desnutridos é especulativo, não havendo evidências que caracterizem a desnutrição como fator agravante da doença. Assim, este estudo avaliou os efeitos metabólicos e histopatológicos da infecção por G. lamblia em animais previamente desnutridos. Utilizaram-se 32 gerbils, fêmeas, com 4 a 6 semanas, distribuídos em 4 grupos: Controle (CT) e Controle Infectado (CTIn), recebendo dieta com 20% de proteína; Desnutrido (DN) e Desnutrido Infectado (DNIn), com dieta contendo 5% de proteína. No 28º dia de experimento, os animais dos grupos CTIn e DNIn foram infectados com G. lamblia, oralmente, permanecendo infectados por 7 dias, quando todos animais foram eutanasiados e coletados sangue, intestino delgado, fígado e conteúdo cecal. Os animais foram pesados semanalmente utilizando-se balança com escala. Para avaliação bioquímica, as dosagens séricas de glicemia, albumina, colesterol e triglicerídeos foram determinadas por ensaio enzimático, sendo que a de proteínas totais foi feita pelo método de Bradford. O fracionamento das lipoproteínas séricas foi realizado pelo sistema de Fast Protein Liquid Chromatografy. A determinação dos lípides hepáticos e cecais foi realizada conforme descrito por Folch e colaboradores. A avaliação do estresse oxidativo baseou-se na dosagem da concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, na dosagem de catalase e de superóxido dismutase. Para análise histológica, a porção proximal do intestino delgado foi coletada, fixada e destinada à obtenção de cortes e coloração com Hematoxilina & Eosina, Ácido Periódico de Schiff e para produção de lâminas para imunohistoquímica. A altura das vilosidades, área de muco e área de trofozoítos foram calculadas através do software KS300 contido no analisador de imagens Carl Zeiss. Os resultados foram expressos em média±erro padrão, utilizando-se os testes de Shapiro-Wilk, para verificar a normalidade da amostra e a Análise de Variância, seguida do teste de Tukey para comparação entre os grupos experimentais. Utilizou-se o pacote estatístico SPSS versão 20.0, considerando-se um nível de significância de 5%. Observou-se que os gerbils alimentados com dieta hipoprotéica apresentaram peso corporal significativamente menor, além de ingestão reduzida. Não foram observadas alterações nos parâmetros séricos entre os grupos. No entanto, na avaliação do perfil de lipoproteínas, verificou-se que os níveis de colesterol e proteína foram significativamente menores no grupo DNIn em relação ao CT. A avaliação de lipídeos hepáticos não demonstrou diferença entre os grupos. No entanto, foi observado que o grupo CTIn apresentou maior concentração de colesterol cecal que o grupo DN. A avaliação do estresse oxidativo mostrou diferença significativa na produção de Catalase, sendo que esta encontrava-se maior no grupo DNIn. Os demais parâmetros relacionados ao estresse oxidativo não apresentaram diferenças. A altura das vilosidades apresentou-se menor no grupo DNIn, quando comparado ao grupo CTIn. Não houve diferença estatística entre o grupo DN e o grupo DNIn. Quanto à área de muco, foi possível observar diferença estatística entre os grupos CT e DNIn. A análise imunohistoquímica da quantidade de Giardia na mucosa intestinal dos animais, não revelou diferenças significativas entre os grupos CTIn e DNIn. Em resumo, este estudo demonstrou que a giardíase em animais desnutridos produziu alterações metabólicas e na estrutura das microvilosidades, sugerindo o agravamento da doença em desnutridos.
Abstract: Giardiasis, intestinal infection caused by Giardia lamblia is an importante cause of diarrhea and intestinal malabsorption. Several studies have evaluated the influence of this disease on nutritional status. However, the impact of giardiasis in malnourished is speculative and there is no evidence that characterize malnutrition as an aggravating factor of the disease. This study assessed the metabolic and histopathological effects of G. lamblia infection in previously malnourished animals. We used 32 gerbils, female, 4-6 weeks, divided into 4 groups: Control (CT) and Control Infected (CTIn), fed a diet with 20% protein; Malnourished (DN) and Malnourished Infected (DNIn) with a 5% protein diet. On the 28th day of the experiment, the animals in groups and CTIn and DNIn were infected with G. lamblia, orally, remaining infected for 7 days, when all animals were euthanized and sampled blood, small intestine, liver and cecum content. The animals were weighed weekly using a scale. For biochemical evaluation, serum glucose, albumin, cholesterol and triglycerides were determined by enzymatic assay, and the total protein was performed by the Bradford method. The fractionation of the serum lipoproteins was performed by Fast Protein Liquid Chromatografy System. The determination of liver and cecal lipids was performed as described by Folch et al. The evaluation of oxidative stress was based on the determination of the concentration of thiobarbituric acid reactive substances and the dosage of catalase and superoxide dismutase. For histological analysis, the proximal small intestine was collected, fixed and intended for obtaining sections and staining with Hematoxylin & Eosin, Periodic Acid-Schiff and production of sections for immunohistochemistry. The villus height, mucus and trophozoites área were calculated using the software KS300 contained in Carl Zeiss image analyzer. Results were expressed as mean ± standard error, using the Shapiro-Wilk test to verify the normality of the sample and Analysis of Variance followed by Tukey test for comparison between experimental groups. We used the statistical package SPSS version 20.0, considering a significance level of 5%. It was observed that gerbils fed a low protein diet had significantly lower body weight, and reduced intake. There were no changes in serum parameters between groups. However, in lipoprotein profile, it was found that levels of protein and cholesterol were significantly lower in group DNIn compared to CT. The evaluation of liver lipids showed no difference between groups. However, it was observed that the group CTIn showed higher concentration of cholesterol in cecum contente than DN. The evaluation of oxidative stress was significantly different in catalase production, higher in DNIn than CT. The other parameters related to oxidative stress did not differ. The villus height was lower in the group DNIn when compared CTIn group. There was no statistical difference between the group and the group DN and DNIn. Regarding the area of mucus, we observed a statistical difference between groups CT and DNIn. Immunohistochemical analysis of the amount of Giardia trophozoites in the intestine of animals revealed no significant differences between groups and CTIn and DNIn. In summary, this study demonstrated that giardiasis in malnourished animals produced and metabolic changes in the structure of microvilli, suggesting worsening of the disease in malnourished.
Subject: Parasitologia
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-935QRY
Issue Date: 10-Dec-2012
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