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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9N6KWZ
Tipo: | Tese de Doutorado |
Título: | Utilização de uma linhagem invasiva de Lactococcus lactis como veículo para a entrega de um plasmídeo vacinal codificando o antígeno Ag85A de Mycobacterium tuberculosis em células mamíferas e avaliação do perfil de resposta imunológica gerado em modelo murino |
Autor(es): | Pamela Del Carmen Mancha Agresti |
Primeiro Orientador: | Anderson Miyoshi |
Primeiro Coorientador: | Sophie Yvette Leclercq |
Resumo: | O uso de bactérias como veículos para a entrega de plasmídeos vacinais por via das mucosas constitui uma estratégia de vacinação promissora. Neste contexto, bactérias patogênicas atenuadas como Shigella, Yersinia, Listeria e Salmonella vêm sendo utilizadas para a entrega de plasmídeos vacinais às células mamíferas, embora apresentem risco de reversão ao seu fenótipo patogênico. Visando contornar este problema, a utilização de bactérias não patogênicas, tais como as Bactérias Lácticas (BL), vem sendo proposta. Dentro do grupo das BL, Lactococcus lactis vem sendo extensivamente utilizado para a produção e entrega de antígenos e citocinas em nível de mucosas. Estudos envolvendo esta bactéria têm também focado em sua utiilização como veículo para entrega de vacinas gênicas, sendo desenvolvidas linhagens invasivas de L. lactis para aumentar a eficiência de entrega das referidas vacinas às células do hospedeiro. Nosso grupo de pesquisa desenvolveu um plasmídeo replicativo em L. lactis, contendo um cassete de expressão eucariótica, o pValac (Vaccination usig lactic acid bacteria). Assim, o uso de linhagens invasivas de L. lactis para a entrega do vetor pValac expressando o antígeno Ag85A de M. tuberculosis, poderia representar uma nova estratégia para o controle da tuberculose. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi a construção do plasmídeo vacinal pValac:Ag85A e a verificação de sua funcionalidade in vitro, utilizando células eucarióticas da linhagem CHO (Chinese Hamster Ovary), bem como sua clonagem na linhagem invasiva L. lactis FnBPA+, gerando assim, a linhagem L. lactis FnBPA+ (pValac:Ag85A). Esta linhagem, por sua vez, foi utilizada em experimentos de imunização de camundongos C57BL/6 e as respostas imunes humoral e celular, geradas pela mesma, foram avaliadas. Como um todo, observou-se uma polarização da resposta imune para o padrão Th1, nos animais imunizados com a referida linhagem em relação aos animais dos grupos controles. Além disso, observou-se a produção das imunoglobulinas IgG e sIgA nas mucosas, especificamente na mucosa respiratória. Em suma, este projeto constitui um primeiro passo rumo à validação da eficácia e efetividade de novas vacinas gênicas baseadas em bactérias lácticas geneticamente modificadas, por via de administração em mucosas. |
Abstract: | Using bacteria as a vehicle for orally delivering vaccines plasmids is considered a promissing vaccination strategy. Thus, attenuated pathogenic bacteria, such as Shigella, Yersinia, Listeria and Salmonella are being used for delivering plasmids of vaccine type to mammal cells. However, there is a risk of reversing to its wild phenotype. In order to counteract this problem, we propose the use of non pathogenic bacteria, as lactic bacteria (BL). Within the group of lactic bacteria, the Lactococcus lactis is deemed as a model microorganism, which is being extensively used for antigen and cytokines production and delivery to the mucosal level. Recently studies about this bacteria have focused on their usage as vehicles for the delivery of genic vaccines. For this, invasive strains of L. lactis have been developed in order to increase the delivery efficiency of these vaccines to host cells. Furthermore, our investigation team developed a plasmid that replicates in L. lactis and contains a eukaryotic expression cassette named pValac (Vaccination using lactic acid bactéria). In this way, the use of invasive strains of L. lactis for the delivery of vector pValac expressing the antigen Ag85A of Mycobacterium tuberculosis could represent a new strategy for controlling tuberculose. The aim of this investigation was not only the development of plasmid vaccine pValac:Ag85A and its functional evaluation in vitro but also its clonation in its L. lactis FnBPA+ invasive strain for using this system as a potential genic vaccine. The highly functional performance of the eukaryotic expression cassette when coding antigen Ag85A was confirmed through the detection of Ag85A protein through of immunocytochemistry; and flow cytometry after tansfecting pValac within mammalian cells. Finally, plasmid pValac:Ag85A was transformed into invasive L. lactis strain, originating L. lactis FnBPA+ (pValac:Ag85A) strain. This strain was used in C57BL/6 mice intranasal immunization. The humoral and cellular immune responses were evaluated. We observed a polarization of the immune response towards a Th1, in immunized mice with it strain. In the respiratory mucosal, we detected production of both, IgG and sIgA, antibody. In this way, this project is the first step towards the effective validation of new genetic vaccines based on lactic bacteria genetically modified administered in mucosal level. |
Assunto: | Mycobacterium tuberculosis Plasmideos Genética Vacinas de DNA |
Idioma: | Português |
Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Sigla da Instituição: | UFMG |
Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9N6KWZ |
Data do documento: | 14-Mai-2014 |
Aparece nas coleções: | Teses de Doutorado |
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