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Type: Tese de Doutorado
Title: Segurança e efeito probiótico de Weissella paramesenteroides WpK4 isolada de suíno na infecção experimental com Salmonella Typhimurium em camundongos
Authors: Luige Biciati Alvim
First Advisor: Alvaro Cantini Nunes
First Co-advisor: Elisabeth Neumann
Abstract: A diarreia em suínos causada por Salmonella spp. e outros patógenos pode ser um sério problema para os produtores e, por isso, requer prevenção e tratamento. Antimicrobianos vem sendo utilizados para combater estas infecções, entretanto, a possível seleção de resistência bacteriana devido à aplicação de doses sub-terapêuticas destas drogas tem levado as autoridades competentes a proibir seu uso indiscriminado na alimentação animal como tradicionais promotores de crescimento. Assim, os probióticos têm emergido como uma potencial alternativa, pois proporcionam benefícios à microbiota intestinal e mostram capacidade imunomoduladora em seu hospedeiro. Neste contexto, este estudo teve como objetivo selecionar linhagens autóctones de Bactérias do Ácido Lático (BAL) a partir de sua segurança e propriedades probióticas para uso como suplemento alimentar para suínos como uma terapia livre de antimicrobianos. Vinte e quatro BAL dos gêneros Lactobacillus e Weissella obtidas a partir de fezes, mucosa nasal e oral de suínos foram previamente identificadas e submetidas a testes in vitro. Neste trabalho, as linhagens isoladas passaram por outros ensaios de caracterização in vitro (teste de produção de peróxido de hidrogênio, síntese de exopolissacarídeo, perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e atividade isoantagonista), sendo a linhagem Weissella paramesenteroides WpK4 o candidato probiótico mais promissor. Esta linhagem cumpriu plenamente os requisitos estabelecidos nos testes preliminares in vitro, demonstrando resistência ao pH ácido estomacal e aos sais biliares intestinais, superfície celular hidrofóbica, produção de H2O2 e exoplisacarídeos (EPS), forte antagonismo contra patógenos bacterianos e resistência a antibióticos apenas codificada intrinsicamente (oxacilina e vancomicina). Assim, a linhagem WpK4 foi selecionada para ser testada em modelos de infecção experimental com salmonela em camundongos isentos de germe e convencionais. A administração com W. paramesenteroides WpK4 em camundongos convencionais e isentos de germe mostrou-se segura, não apresentando sinais de translocação para o fígado e baço, não promovendo lesões nestes órgãos e no intestino, nem aumento da taxa de mortalidade ou perda de peso nos animais. WpK4 mostrou efeito probiótico ao atenuar a perda de peso e mortalidade, assim como promover a proteção do intestino delgado e cólon dos animais infectados com Salmonella Typhimurium. Além disso, a linhagem foi capaz de modular a resposta imune por inibir a produção de citocinas pró-inflamatóras e induzir mediadores regulatórios. Estes resultados demonstram as propriedades probióticas de Weissella paramesenteroides WpK4, habilitando-a para possível uso em suínos.
Abstract: Diarrhea in piglets by Salmonella spp. and other pathogens can be a serious problem and require prevention and treatment. Antimicrobials have been used to combat these infections; however, the induction of bacterial resistance due to the undiscriminating use of sub-therapeutic doses into animal food has led governor authorities to prohibit these traditional growth promoters. Thus, probiotics have emerged as potential substitutes, as they provide benefits to the intestinal microbiota and show immunomodulatory capacity in its host. The aim of this study was to select autochthonous strains of Lactic Acid Bacteria (LAB) isolated from healthy piglets according to their probiotic properties and safety for further use as a food supplement for piglets as a non-drug therapy for controlling gastrointestinal microbiota dysbiosis and stimulating host immune system. Twenty-four LAB of Lactobacillus and Weissella genera isolated from oral and nasal mucosa and feces of piglets were previously identified and subjected to in vitro assays. In this work, strains were in vitro tested for hydrogen peroxide production, exopolysaccharide synthesis, antimicrobial susceptibility and isoantagonistic activity. The Weissella paramesenteroides WpK4 was considered to be the most promising probiotic candidate, as it presented high resistance to acidic pH and bile salts, a hydrophobic cell surface, H2O2 and EPS production, strong antagonism against bacterial pathogens, and only intrinsically-encoded antibiotic resistance (oxacillin and vancomycin). Thus, it was selected for in vivo trials in an experimental mouse model of salmonellosis. Conventional and germ-free mice fed with WpK4 showed no signs of bacterial translocation to the liver or spleen and decreased salmonella translocation to these organs. Significantly, WpK4 colonization attenuated the weight loss, fostered the preservation of intestinal architecture and integrity, and promoted survival in mice following infection with Salmonella Typhimurium. In addition, WpK4 modulates immune response by inhibiting the production of pro-inflammatory cytokines and induce anti-inflammatory mediators. These findings validate the suitable probiotic properties of the W. paramesenteroides WpK4 strain, and provide for its eventual use in piglets.
Subject: Probióticos
Weissella paramesenteroides
Salmonela Tyhimurium
Genética
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9WMUS3
Issue Date: 27-Mar-2015
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