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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-AP8NS5| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Fatores de virulência e resistência de amostras clínicas de Acinetobacter baumannii: caracterização fenotípica e genotípica e análise da interferência destes fatores na evolução e resolução dos processos |
| Authors: | Rafaela Oliveira França |
| First Advisor: | Simone Goncalves dos Santos |
| First Co-advisor: | Vandack Alencar Nobre Junior |
| Abstract: | O sucesso das infecções por Acinetobacter baumannii pode ser atribuído a diversos fatores de virulência, como sua habilidade em formar biofilmes, aderir, colonizar e invadir células epiteliais humanas; seu repertório de mecanismos de resistência a antimicrobianos e sua habilidade em adquirir material genético de outros micro-organismos, promovendo sua sobrevivência, sob pressão seletiva de antimicrobianos. Buscou-se avaliar, por parâmetros fenotípicos e genotípicos, a presença de fatores de virulência em amostras de Acinetobacter baumannii recuperadas de pacientes atendidos no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) e investigar a associação desses fatores com alguns desfechos clínicos. Foram avaliadas 62 amostras clínicas de A.baumannii provenientes de 37 pacientes. As amostras foram submetidas a testes de susceptibilidade aos antimicrobianos e verificação da expressão de metalobetalactamases pelo método ETest®. A reação em cadeia da polimerase foi realizada para detecção dos seguintes genes: blaOXA23, blaOXA24, blaOXA51, blaOXA58, blaOXA143, blaVIM-1, csuE, ompA e do elemento de inserção ISAba1. Foram realizados ensaios fenotípicos de formação de biofilme em microplacas de poliestireno e de indução de apoptose em células A549. A diversidade genética entre as amostras foi avaliada por ERIC-PCR. Por fim, realizou-se a caracterização clínico-epidemiológica dos pacientes e a associação entre a presença de genes de virulência e alguns desfechos clínicos. Identificaram-se altos índices de resistência aos antimicrobianos entre as amostras de A. baumannii avaliadas, exceto à polimixina B. Os genes blaOXA23 e blaOXA51 foram encontrados simultaneamente na quase totalidade das amostras de A. baumannii estudadas; já os genes blaOXA24, blaOXA58 e blaOXA143 não foram identificados em nenhuma amostra. blaVIM-1 foi detectado na maioria das amostras de A.baumannii avaliadas, assim como ISAba1upstream a blaOXA51. Foram encontrados 03 grupos clonais distintos entre as amostras avaliadas. A ausência de csuE e ompA não alteraram a capacidade de formação de biofilme em microplacas de poliestireno pelas amostras analisadas. A indução de apoptose em células A549 ocorreu independente da presença de ompA, mas amostras positivas para tal gene foram capazes de reduzir a contagem celular, quando comparadas às amostras ompA negativo testadas (p<0.05).Mais de 80% das células A549 inoculadas com A.baumannii apresentaram morte celular por apoptose em 03 horas de incubação. Cerca de 91% e 38,2% dos pacientes que apresentaram os genes csuE e ompA, respectivamente, desenvolveram doença infecciosa por A.baumannii. Quando os dois genes estiveram presentes, esta porcentagem foi de39,4%. Estes resultados reforçam a importância clínico-epidemiológica de A.baumannii no ambiente hospitalar e fornecem dados importantes sobre a epidemiologia molecular e expressão de genes de resistência e virulência por A.baumannii no cenário hospitalar brasileiro. |
| Abstract: | The success of Acinetobacter baumannii infections can be attributed to several virulence factors, such as their ability to form biofilms, adhere, colonize and invade human epithelial cells; their repertoire of antimicrobial resistance mechanisms and their ability to acquire genetic material from other microorganisms, promoting their survival under selective pressure of antimicrobials. The aim of this study was to evaluate, by phenotypic and genotypic parameters, the presence of virulence and resistance factors in Acinetobacter baumannii recovered samples of patients of the Clinical Hospital of the Federal University of Minas Gerais (UFMG) and to investigate the association of these factors with some clinical outcomes. 62 clinical samples of A.baumannii from 37 patients were evaluated. The samples were subjected to antimicrobial susceptibility testing and verification of expression by metalobetalactamases Etest® method. The polymerase chain reaction was performed for the detection of the following genes: blaOXA23, blaOXA24, blaOXA51, blaOXA58, blaOXA143, blaVIM-1, csuE, ompA and the insertion sequence ISAba1. Phenotypic assays to evaluate biofilm formation were performed in polystyrene microtiter plates and induction of apoptosis were performed in A549 cells. Genetic diversity among the samples was evaluated by ERIC-PCR. Finally, we described the clinical and epidemiological characteristics of patients and the association between the presence of virulence genes and some clinical outcomes. Were identified high rates of antimicrobial resistance between the analyzed samples of A. baumannii except to polymyxinB. The genesblaOXA23 and blaOXA51 were found simultaneously in almost all of A. baumannii studied samples; however the genesblaOXA24, blaOXA58 and blaOXA143 were not identified in any sample. blaVIM-1 was detected in most samples of A.baumannii evaluated, as well as the ISAba1upstream blaOXA51. We found 03 distinct clonal groups between the analyzed samples. The absence of csuE and ompA not altered the capacity of biofilm formation in polystyrene microplates by the analyzed samples. Induction of apoptosis in A549 cells occurred despite the presence of ompA, but such samples positive for gene were able to reduce cell count, compared to negative ompA samples tested (p <0.05). More than 80% of inoculated with A549 cells A.baumannii showed apoptotic cell death after 03 hours of incubation. About 91% and 38.2% of patients with the csuE and ompA genes, respectively, developed infectious disease by A.baumannii. When the two genes were present, this percentage was 39.4%. These results reinforce the clinical and epidemiological importance of A.baumannii in the hospital environment and provide important data on the molecular epidemiology and expression of resistance genes and virulence by A.baumannii at Brazilian hospital setting. |
| Subject: | Microbiologia |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-AP8NS5 |
| Issue Date: | 9-Mar-2015 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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