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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-AR4GHC| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Estudo para o desenvolvimento de biossensor impedimétrico não marcado para detecção de veneno ofídico |
| Authors: | Ricardo Adriano Dorledo de Faria |
| First Advisor: | Tulio Matencio |
| First Co-advisor: | Luiz Guilherme Dias Heneine |
| metadata.dc.contributor.advisor-co2: | Vanessa de Freitas Cunha Lins |
| Abstract: | Os acidentes ofídicos representam grave problema de saúde pública em função da frequência e a gravidade com que ocorrem em todo o planeta, sendo a soroterapia a única forma aprovada de tratamento de pacientes envenenados. No entanto, a administração do soro correto no paciente acometido pelo veneno ofídico é realizada ainda por técnicas bastante inconsistentes. Neste sentido, esta pesquisa propôs o estudo do desenvolvimento de biossensores para a detecção analítica e específica de veneno de serpentes de Bothrops, gênero responsável pela majoritária ocorrência de acidentes ofídicos no Brasil. Assim, foram avaliados o emprego de diferentes substratos transdutores para a o desenvolvimento do imunodiagnóstico, produzindo-se Polianilina (PANI) e dióxido de titânio, e obtendo-se comercialmente os substratos de óxido de índio dopado com estanho, aço Crofer 22 APU e ouro, que foram caracterizados por técnicas eletroquímicas, espectroscópicas e de microscopia. Para a funcionalização destes substratos, anticorpos foram purificados por Cromatografia de Imunoafinidade a partir de plasma de cavalo hiperimunizado contra um pool dos venenos B. alternatus, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni e B. neuwiedi, e apresentaram alta pureza revelada pela técnica de Eletroforese em Gel de Poliacrilamida. Os anticorpos obtidos foram empregados como elemento de reconhecimento biológico sobre a superfície dos transdutores e os biossensores produzidos foram avaliados quanto à sensibilidade e especificidade de detecção de veneno botrópico utilizando a técnica de Espectroscopia de Impedância Eletroquímica, numa faixa de frequência de 104 a 10-2 Hz, com amplitude de potencial de 10 mV a partir do potencial de circuito aberto. Os resultados indicaram a eficácia da produção de PANI e TiO2, o sucesso da funcionalização de todos os transdutores e a capacidade de detectarem o analito de interesse com um tempo médio de diagnóstico de 36,58 minutos. A PANI apresentou a maior sensibilidade analítica (com limite de detecção menor que 0,1 g.mL-1) e alta especificidade, não gerando resposta impedimétrica significativa quando exposta aos venenos de serpentes dos gêneros Crotalus e Micrurus. |
| Abstract: | Snakebites represent a serious public health problem due to the frequency and severity of the accidents all over the world, and serotheraphy is the only approved treatment for envenomed patients. However, the right serum management to the snakebite patient is still performed using inconsistent techniques. In this sense, this research purposed the study of biosensors development for analytical and specific detection of Bothrops snakes venom, genus responsible for the major occurrence of snakebites in Brazil. Thus, the employment of different transducer substrates was evaluated for the immunodiagnosis development, producing Polyaniline (PANI) and titanium dioxide, and commercially obtaining substrates of tin-doped indium oxide, Crofer 22 APU steel and gold, which were characterized by electrochemical, spectroscopic and microscopic techniques. To functionalize these substrates, Immunoaffinity Chromatography was used to purify antibodies from plasma of horse immunized against a pool of venoms from B. alternatus, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni e B. neuwiedi, whose purity was revealed by Polyacrylamide Gel Electrophoresis. The obtained antibodies were employed as element of biological recognition onto the transducers surface and the produced biosensors were evaluated for their sensibility and specificity for detection of bothropic venom, using Electrochemical Impedance Spectroscopy, in a frequency range of 104 a 10-2 Hz, with a potential amplitude of 10 mV above the open circuit potential. The results indicated the efficacy of PANI and TiO2 production, the success of the transducers functionalizing and their capability to detect the analyte of interest in an average time of 36.58 minutes. PANI showed the greatest analytical sensibility (with a minimum limit detection lower than 0,1 g.mL-1) and a high specificity, not generating a significant impedimetric response when it was exposed to venom from snakes ofCrotalus and Micrurus genera. |
| Subject: | Dióxido de titânio Cobra venenosa Veneno Engenharia quimica Espectroscopia de impedância |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-AR4GHC |
| Issue Date: | 2-Feb-2017 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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