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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-B44PQJ
Tipo: | Dissertação de Mestrado |
Título: | Marcadores moleculares para famílias de Trematódeos transmitidos por moluscos do gênero Biomphalaria Preston, 1910 |
Autor(es): | Silvia Gonçalves Mesquita |
Primeiro Orientador: | Daniella Castanheira Bartholomeu |
Primeiro Coorientador: | Roberta Lima Caldeira |
Primeiro membro da banca : | Elida Mara Leite Rabelo |
Segundo membro da banca: | Roberta Lima Caldeira |
Terceiro membro da banca: | Marina de Moraes Mourão |
Resumo: | A classe Trematoda compreende helmintos cujo ciclo de vida é complexo passando por diferentes hospedeiros durante o seu desenvolvimento. Por atuarem como hospedeiros intermediários, moluscos do gênero Biomphalaria são imprescindíveis para a manutenção do ciclo biológico de diversos trematódeos. É importante identificar corretamente esses parasitos uma vez que, alguns deles, podem apresentar impactos na saúde humana e animal, econômicos e ecológicos. A taxonomia de trematódeos baseada em caracteres morfológicos do estagio larval é metodologicamente complicada, apontando para a necessidade de novas técnicas auxiliares capazes de identificar esses parasitos em qualquer fase evolutiva do seu ciclo. A morfologia das larvas dos trematódeos é semelhante entre si, inclusive semelhante às de S. mansoni, por vezes levando a diagnósticos incorretos resultando em ações de vigilância desnecessárias. Nesse contexto, o uso de marcadores moleculares surge como uma alternativa importante. Esse trabalho se propõe a identificar marcadores moleculares capazes de diferenciar quatro importantes famílias de trematódeos transmitidas por moluscos do gênero Biomphalaria na região neotropical. São essas: Clinostomidae, Echinostomatidae, Schistosomatidae e Strigeidae. Utilizando a ferramenta online TipMT, desenvolvida pelo nosso grupo, foram desenhados iniciadores família-específicos direcionados para o DNA ribossomal visando sua utilização em PCR multiplex, uma técnica que apresenta alta especificidade, baixo custo e simples execução. Como molde para as reações, foram utilizadas amostras de larvas de trematódeos liberadas por moluscos do gênero Biomphalaria e amostras de moluscos parasitados, depositadas na Coleção de Malacologia Médica (Fiocruz-CMM). Os iniciadores se mostraram eficazes na identificação e diferenciação das quatro famílias nas mesmas condições da PCR. A especificidade dos iniciadores foi avaliada, não havendo amplificação inespecífica de outros trematódeos, nematódeo e espécies de Biomphalaria presentes no território brasileiro. Os iniciadores se mostraram sensíveis na faixa de 0,1 ng a 1ag de DNA do parasito. Essa metodologia também se mostrou eficaz para a detecção de coinfeccção. Através de uma única metodologia rápida e precisa é possível realizar o exame de infectividade e a identificação da família do parasito. A identificação em nível de família fornece importantes informações sobre prováveis hospedeiros definitivos e impactos gerados na região da coleta possibilitando assim, o delineamento de melhores estratégias de controle. |
Abstract: | The Trematoda class encompasses helminths whose life cycle is complex passing through different hosts during its development. Because Biomphalaria snails act as intermediate hosts, they are very important for the maintenance of the biological cycle of several trematodes. It is important to properly recognize and identify trematode parasites that infect Biomphalaria, since different groups may have an impact on human and animal health, besides economical and ecological impacts. The taxonomy based on morphological characters of the larval form of trematodes is methodologically complicated, highlighting the need for new auxiliary techniques capable of identifying these parasites at any evolutionary stage of their cycle. Therefore, molecular tools appear as an attractive alternative. This work aims at identifying molecular markers capable of distinguishing four important families of trematodes, Clinostomidae, Echinostomatidae, Schistosomatidae and Strigeidae, all transmitted by molluscs of the genus Biomphalaria in the neotropical region. Using the online tool TipMT, developed by our group, we have designed trematode family-specific primers targeting the ribosomal DNA region optimized to be used in multiplex PCR, a technique that presents high specificity, low cost and simple execution. gDNA samples of the trematode larvae shed by molluscs of the genus Biomphalaria and from parasitized molluscs from the Medical Malacology Collection (Fiocruz-CMM) were used as a template for the PCR reactions. The panel of primers identified in this study was effective in identifying and distinguishing the four trematode families at the same PCR condition. The specificity of the primers was confirmed using gDNA obtained from other trematodes families, nematode and Biomphalaria species present in the brazilian territory. The primers were sensitive in the range of 0.1 ng to 1 ag of DNA of the parasite. This methodology was also effective for the detection of coinfections. Through a simple, fast and accurate methodology, it is possible to accurately identify and distinguish the trematode families included in this study in biological samples in a single PCR reaction. A family level identification provides important information about probable hosts and impacts generated in the affected region, thus allowing the designing of better strategies to control. |
Assunto: | Parasitologia |
Idioma: | Português |
Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
Sigla da Instituição: | UFMG |
Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-B44PQJ |
Data do documento: | 26-Fev-2018 |
Aparece nas coleções: | Dissertações de Mestrado |
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