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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-BAVK8A| Tipo: | Dissertação de Mestrado |
| Título: | Determinação simultânea de sulfonilureias em plasma humano empregando cromatografia a líquido com coluna de meio de acesso restrito e coluna com partículas de núcleo fundido |
| Autor(es): | Juliana Veloso Ferreira |
| primer Tutor: | Gerson Antonio Pianetti |
| primer Co-tutor: | Christian Fernandes |
| primer miembro del tribunal : | Leonardo de Souza Teixeira |
| Segundo miembro del tribunal: | Isabela da Costa Cesar |
| Resumen: | O diabetes mellitus é uma das principais causas de morbidade e mortalidade na população, sendo a classe das sulfonilureias amplamente utilizadas no seu tratamento. Atualmente, sua determinação em matrizes biológicas é realizada por meio de técnicas de preparo de amostras convencionais, o que frequentemente leva ao aumento do tempo total da análise e dos erros analíticos. Essas limitações podem ser reduzidas com o uso de colunas com meio de acesso restrito (RAM), que possibilitam a injeção direta de fluidos biológicos nos sistemas cromatográficos. Ademais, o uso de colunas de núcleo fundido, que permitem o emprego de altas vazões de fase móvel (FM), leva à redução do tempo total da análise. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de método bioanalítico para a determinação simultânea de três fármacos da classe das sulfonilureias: glibenclamida, gliclazida e glimepirida, em plasma humano, empregando cromatografia a líquido de alta eficiência bidimensional (column switching automatizado) em modo de eluição backflush, com coluna RAM, como fase de exclusão, acoplada à coluna com partículas de núcleo fundido. A média das porcentagens de exclusão das proteínas plasmáticas pela coluna RAM foi de 104,5%. As condições do método desenvolvido, para a primeira dimensão, foram: coluna RAM-ADS, FM constituída de água ultrapura pH 6,0, com vazão de 1,0 mL min-1 e tempo de viragem de válvula de 3 minutos. Na segunda dimensão foi empregada précoluna C18 acoplada a coluna analítica contendo partículas de núcleo fundido C18, FM constituída de acetonitrila e tampão fosfato 10 mM pH 3,0 (54:46 v/v), com vazão de 0,8 mL min-1. O tempo de eluição dos analitos foi de 1 minuto, a temperatura de 35°C, o volume de injeção de 200 µL e o comprimento de onda de detecção de 230 nm. Foi empregado ácido flufenâmico como padrão interno. O tempo total da análise, englobando o tempo referente à etapa cromatográfica (8 minutos) e o tempo dedicado à extração (3 minutos para exclusão proteica e 1 minuto para eluição dos analitos), foi de apenas 12 minutos. |
| Abstract: | Diabetes mellitus is one of the main causes of morbidity and mortality in the population and the sulfonylureas are widely used in the treatment. Currently, its determination in biological matrices is performed by conventional sample treatment techniques, which often leads to an increase of the total time of analysis and analytical errors. These limitations can be reduced by using columns with restricted access media (RAM), which allow the direct injection of biological fluids in chromatographic systems. Furthermore, the use of fused-core particles columns, allowing the use of high mobile phase (MP) flow rates, lead to a reduced total analysis time. Given the above, this study aimed to develop a bioanalytical method for the simultaneous determination of three drugs of the sulfonylurea class: glibenclamide, gliclazide and glimepiride in human plasma, using a two- dimensional high performance liquid chromatography (column switching automated) in backflush elution mode, with RAM column, as exclusion phase, coupled with a fused-core particle column. The average plasma protein exclusion percentages of the RAM column was 104.5%. The conditions of the method developed, for the first dimension, were: RAM-ADS column, MP consisting of ultrapure water pH 6.0, ate 1.0 mL min-1 flow rate and 3 minute turning valve time. In the second dimension was employed a guard column (C18) coupled with a fused-core particle column (C18), MP consisting of acetonitrile and 10 mM phosphate buffer pH 3.0 (54:46 v/v) with a 0.8 mL min-1. The elution time of the analytes was 1 minute, temperature was set at 35°C, injection volume set as 200 µL and wavelength detection was set as 230 nm. Flufenamic acid was used as internal standard. The total time of analysis, including the time related to de chromatographic step (8 minutes) and the time devoted to the extraction (3 minutes for protein exclusion and 1 minute for the analytes elution) was only 12 minutes. |
| Asunto: | Validação de método Plasma sanguíneo Cromatografia líquida de alta eficiência Tecnologia farmaceutica |
| Idioma: | Português |
| Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Sigla da Institución: | UFMG |
| Tipo de acceso: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-BAVK8A |
| Fecha del documento: | 29-jun-2015 |
| Aparece en las colecciones: | Dissertações de Mestrado |
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