Uso de Células tronco mesenquimais para engenharia do tecido ósseo in vitro: desenvolvimento de matrizes tridimensionais poliméricas porosas e efeitos da atividade da telomerase na expressão de osteopontina e osteocalcina durante a diferenciação celular

Carolina Barcellos Machado

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DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor1	Alfredo Miranda de Goes	pt_BR
dc.contributor.referee1	Mari Cleide Sogayar	pt_BR
dc.contributor.referee2	Marivalda de Magalhaes Pereira	pt_BR
dc.contributor.referee3	Sergio Danilo Junho Pena	pt_BR
dc.contributor.referee4	Jose Mauro Granjeiro	pt_BR
dc.creator	Carolina Barcellos Machado	pt_BR
dc.date.accessioned	2019-08-13T18:04:28Z	-
dc.date.available	2019-08-13T18:04:28Z	-
dc.date.issued	2007-04-20	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/1843/CMFC-78RM6C	-
dc.description.resumo	Neste estudo, matrizes tridimensionais porosas foram desenvolvidas para manter e acentuar o processo de diferenciação de células tronco mesenquimais em osteoblastos, in vitro. Nós também investigamos o efeito da introdução da subunidade catalitica da telomerase (hTERT) em células tronco mesenquimais humanas, durante o processo osteogênico. Células tronco mesenquimais de rato e humanas foram isoladas da medula óssea e caracterizadas por FACS ou PCR. Para promover a diferenciação, MSC foram cultivadas em meio DMEM modificado contendo 10% de soro fetal bovino, ácido -8 -8 M), -glicerofosfato (10mM) e dexametasona (10ascórbico (0.2mM), vitamina D3(10M). As células foram plaqueadas em matrizes feitas de polímeros naturais (quitosana, gelatina, condroitina, alginato e celulose) contendo ou não fosfato de cálcio. As matrizes foram ligadas com EDAC ou genipina. As propriedades fisico químicas das matrizes 3D foram avaliadas através de SEM, degradação hidrolitica, testes de compressão e ensaios reológicos. A viabilidade celular e a atividade da fosfatase alcalina foram mediadas com 7, 14 e 21 dias através do ensaio de MTT e ALP, respectivamente. A diferenciação celular foi avaliada por PCR. Células expressando telomerase foram analizadas por PCR semi quantitativo. Os resultados deste estudo mostraram que a proliferação cellular de MSC foi melhorada nas matrizes 3D como mostrado pelos ensaios de MTT e ALP. Após o isolamento, marcadores de células tronco mesenquimais humanas, CD29 e CD 44, foram detectados em hMSC por FACS. O CD 29 foi detectado em rMSC por PCR. A diferenciação foi confirmada pela expressão de osteopontina e osteocalcina, no dia 21. Medidas reológicas mostraram que o genipina promove uma polimerização mais rápida e uma melhor performance mecânica do que as matrizes ligadas com EDAC. SEM mostrou um alta porosidade e interconexão de poros em todos as matrizes. O módulo elástico achado nos testes de compressão das matrizes ligadas com EDAC foram 50 vezes maior do que nas matrizes não ligadas e 18 vezes menor do que nas matrizes ligadas com genipina. Células telomerizadas expressam 3 vezes mais telomerase do que MSC e 50% mais osteopontina e osteocalcina do que osteoblastos normais. Células expressando telomerase não foram capazes de formar tumores em camundongos NUDE após 60 dias. Nossos resultados mostram que estruturas 3D feitas de polímeros naturais aumentaram a proliferação celular e provaram ser um bom ambiente para a diferenciação osteogênica. Além disso, a expressão da telomerase acentuou o processo osteogênico.	pt_BR
dc.language	Português	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal de Minas Gerais	pt_BR
dc.publisher.initials	UFMG	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	osteocalcina	pt_BR
dc.subject	osteopontina	pt_BR
dc.subject.other	Bioquímica	pt_BR
dc.subject.other	Células tronco	pt_BR
dc.subject.other	Osteocalcina	pt_BR
dc.subject.other	Osteopontina	pt_BR
dc.title	Uso de Células tronco mesenquimais para engenharia do tecido ósseo in vitro: desenvolvimento de matrizes tridimensionais poliméricas porosas e efeitos da atividade da telomerase na expressão de osteopontina e osteocalcina durante a diferenciação celular	pt_BR
dc.type	Tese de Doutorado	pt_BR
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