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http://hdl.handle.net/1843/EMCO-9A7HXJ| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Determinação de estatinas em plasma humano empregando cromatografia líquida com colunas de meio de acesso restrito |
| Authors: | Vinicius Freire Fagundes |
| First Advisor: | Gerson Antonio Pianetti |
| First Co-advisor: | Christian Fernandes |
| First Referee: | Isabela da Costa Cesar |
| Second Referee: | Eduardo Costa de Figueiredo |
| Abstract: | O presente trabalho apresenta o preparo de coluna de Meio de Acesso Restrito (RAM) com albumina sérica bovina (BSA) imobilizada por meio de ligações cruzadas com glutaraldeído. A coluna RAM homemade foi comparada com coluna RAM comercial do tipo sílica alquil-diol (ADS) quanto à exclusão de proteínas do plasma humano por meio do método de determinação de proteínas totais de Bradford. Essas colunas foram ainda avaliadas e comparadas quanto à capacidade e qualidade de retenção de micromoléculas determinando os fatores de retenção e de assimetria de nove fármacos com características ácida (cetoprofeno, diclofenaco e pravastatina), neutra (bromazepam, omeprazol e teofilina) ou básica (mebendazol, propranolol e trimetoprima) alterando-se o pH da fase móvel. Foram também desenvolvidos métodos cromatográficos para determinação simultânea de quatro estatinas, fármacos hipolipemiantes, em plasma humano empregando colunas RAM como fases extratoras em sistema column-switching automatizado. As condições cromatográficas como composição e vazão da fase móvel, tempo de viragem da válvula, temperatura do forno e comprimento de onda de detecção na faixa do ultravioleta foram otimizadas para os dois modos de eluição da cromatografia bidimensional: backflush e foreflush. O método empregando o modo backflush, cujo tempo total da corrida analítica foi cerca da metade do tempo necessário no modo foreflush, foi então selecionado para a determinação de lovastatina, pravastatina, rosuvastatina e sinvastatina em plasma utilizando atorvastatina como padrão interno e foi completamente validado segundo a RDC 27 de 2012 da ANVISA. A coluna RAM-BSA possui preparo simples e, assim como a RAM-ADS comercial se mostrou eficiente para a exclusão de proteínas do plasma humano e propiciou retenção adequada para os diferentes compostos avaliados, sendo então uma alternativa viável para a substituição da coluna comercial. O método bioanalítico desenvolvido e validado demonstrou ser simples, rápido, preciso e exato na determinação simultânea de estatinas em plasma humano na faixa de 125 a 876 ngmL-1 para lovastatina, rosuvastatina e sinvastatina e 500 a 2000 ngmL-1 para pravastatina. |
| Abstract: | This study presents the preparation of a Restricted Access Media (RAM) column with immobilized bovine serum albumin (BSA) by crosslinking with glutaraldehyde. The homemade RAM column was compared with commercial alkyl-diol silica (ADS) RAM column regarding human plasma proteins exclusion using the total protein determination method of BRADFORD. These columns were also evaluated and compared in terms of the quality and capacity retention of micromolecules, determining the retention factor and asymmetry of nine acidic (ketoprofen, diclofenac and pravastatin), neutral (bromazepam, omeprazole and theophylline) or basic drugs (mebendazole, propranolol and trimethoprim), changing the mobile phase pH. It was also developed chromatographic methods for statins determination, lipid-lowering drugs, in human plasma using RAM columns as extracting phases in an automated column-switching system. The chromatographic conditions such as mobile phase flow-rate and composition, turning valve time, oven temperature and detection wavelength in the ultraviolet range were optimized for both modes of column-switching chromatography elution: backflush and foreflush. The method employing the backflush mode, whose total time of the analytical run was about a half of the time required in foreflush mode, was then selected for the determination of lovastatin, pravastatin, rosuvastatin and simvastatin in human plasma using atorvastatin as internal standard. This method was fully validated according to RDC 27 of ANVISA. The RAM-BSA column had simple preparation and, as well as ADS-RAM commercial, has shown capacity for excluding human plasma proteins and presented retention suitable for the different compounds evaluated. Thereby, the RAM-BSA column is a viable alternative for replacing the commercial column. The developed and validated bioanalytical method proved to be simple, rapid, precise and accurate for simultaneous determination of statins in human plasma in the range 125-876 ngmL-1 for lovastatin, simvastatin and rosuvastatin and 500-2000 ngmL-1 for pravastatin. |
| Subject: | Validação de método Estatinas (Agentes cardiovasculares) Medicamentos Pesquisa Tecnologia farmaceutica Cromatografia líquida Farmácia |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/EMCO-9A7HXJ |
| Issue Date: | 1-Mar-2013 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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