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http://hdl.handle.net/1843/EMCO-9MVFUB| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Desenvolvimento e validação de métodos analíticos para quantificação de cloroquina e primaquina em comprimidos e em plasma humano |
| Authors: | Tiago Assis Miranda |
| First Advisor: | Gerson Antonio Pianetti |
| First Co-advisor: | Isabela da Costa Cesar |
| First Referee: | Lisiane da Silveira Ev |
| Second Referee: | Josianne Nicacio Silveira |
| Abstract: | A malária é uma doença que afeta a humanidade há tempos, acredita-se que 3,3 bilhões de pessoas vivem em áreas de risco de contaminação de malária. Embora em declínio, o quadro epidemiológico da malária no Brasil é preocupante nos dias atuais. Em 2011, foram registrados 267.045 casos no país, dos quais 87% causados pelo Plasmodium vivax. No tratamento da malária pelo P. vivax, são empregados, de acordo com o Ministério da Saúde, a cloroquina e a primaquina. É extremamente importante conhecer a farmacocinética da cloroquina e da primaquina, quando administrados simultaneamente, visando a garantia de que durante o tratamento, ambos estejam acima da concentração plasmática mínima necessária para a ação farmacológica. Concomitante a necessidades da monitorização terapêutica dos antimaláricos, o desenvolvimento e aplicação de métodos analíticos para identificação e quantificação desses fármacos, são de grande importância para avaliar e garantir a qualidade dos medicamentos comercializados e distribuídos atualmente. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver e validar métodos analíticos para quantificação simultânea de cloroquina e primaquina em comprimidos e em plasma humano. Para determinação dos fármacos em comprimidos, dois métodos analíticos foram desenvolvidos e validados: um por cromatografia à líquido de alta eficiência (CLAE) e um por cromatografia à líquido de ultra eficiência (CLUE). O método por CLAE foi realizado com coluna cromatográfica C18 (100 x 4,6 mm; 5 ìm), mantida a 25 °C. A fase móvel utilizada foi acetonitrila e solução de trietilamina a 0,1% (v/v) com pH ajustado para 3,0 com ácido fosfórico, no modo gradiente. Fluxo de fase móvel de 1000 ìL /min. O volume de injeção foi de 10 ìL e detecção por arranjo de diodos com leitura a 260 nm. O método por CLUE foi realizado com coluna cromatográfica C18 (50 x 2,1 mm; 1,9 ìm), nas mesmas condições do método por CLAE, à exceção do fluxo da fase móvel de 600 ìL/min e o volume de injeção de 7 ìL. Os métodos desenvolvidos cumpriram com os parâmetros de validação exigidos e se mostraram adequados para análises rotineiras. Desenvolveu-se, ainda, método bioanalítico por CLAE com detecção por espectrometria de massas e ionização por eletrospray no modo positivo para quantificação de cloroquina e primaquina em plasma, sendo selecionada a amodiaquina como padrão interno. Para o preparo de amostra, foi selecionado a extração líquido-líquido. A análise cromatográfica foi realizada com coluna cromatográfica ciano (150 x 4,6 mm; 5 ìm), mantida a 30 °C. Fase móvel utilizada foi metanol e solução de acetato de amônio 0,01 M com pH ajustado para 3,0 com ácido fórmico (30:70), no modo isocrático. O fluxo de fase móvel foi de 1000 ìL/min e o volume de injeção foi de 20 ìL. As transições empregadas na detecção por espectrometria de massas para cloroquina, primaquina e amodiaquina foram m/z 320,49 m/z 246,94, m/z 260,48 m/z 174,88 e m/z 356,59 m/z 282,97, respectivamente. O método demonstrou ser seletivo, além de fornecer taxas de recuperação próximas a 100% para todos os fármacos. |
| Abstract: | Malaria is a disease that has affected humanity for a long time, it is believed that 3.3 billion people live in areas at risk of malaria infection. Although declining, the epidemiological situation of malaria in Brazil is worrying today. In 2011, 267 045 cases were registered in the country, of which 87% caused by Plasmodium vivax. In the treatment of malaria by P. vivax, are used chloroquine and primaquine, according to the Ministry of Health. It is extremely important to know the pharmacokinetics of chloroquine and primaquine, when administered simultaneously, in order to guarantee that during treatment, both are above the minimum plasma concentration necessary for pharmacological action. Concomitant to the needs of antimalarial therapeutic monitoring, development and application of analytical methods for identification and quantification of these drugs are of great importance to evaluate and ensure the quality of drugs currently marketed and distributed. The aim of this study was to develop and validate analytical methods for the simultaneous quantification of chloroquine and primaquine tablets and in human plasma. To determine the drugs into tablets, two analytical methods have been developed and validated: high performance liquid chromatography (HPLC) and ultrahigh performance liquid chromatography (UHPLC). The HPLC analysis was performed in a C18 column (100 x 4.6 mm; 5 ìm) and mobile phase composed of acetonitrile and 0.1% (v/v) triethylamines solution with pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid, in gradient mode. The flow rate was 1000 ìL/min and the injection volume was 10 ìL. The UV detection was in 260 nm. The UHPLC analysis was performed in a C18 column (50 x 2.1 mm; 1.9 ìm) under the same conditions HPLC method, except for the flow rate was 600 ìL/min and the injection volume was 7 ìL. The developed method complied with all required validation parameters and showed to be adequate for routine analysis. A bioanalytical method by HPLC with detection by mass spectrometry and eletrospray ionization in the positive mode was developed for the quantitation of chloroquine and primaquine in human plasma, with amodiaquine selected as an internal standard. For the sample preparation, was selected to liquid-liquid extraction. The chromatographic analysis was performed using a cyano column (150 x 4.6 mm; 5 ìm) and the mobile phase composed of methanol and 0.01 M ammonium acetate solution with pH adjusted to 3.0 with formic acid, in isocratic mode. The flow rate was 1000 ìL/min and the injection volume was 20 ìL. The employed transitions for the quantitation of chloroquine, primaquine and amodiaquine were m/z 320,49 m/z 246,94, m/z 260,48 m/z 174,88 and m/z 356,59 m/z 282,97, respectively. The method proved to be selective and provides recovery rates close to 100% for all drugs. |
| Subject: | Validação de método Cromatografia líquida de alta eficiência Tecnologia farmaceutica Cloroquina Espectrometria de massa Antimaláricos |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/EMCO-9MVFUB |
| Issue Date: | 1-Mar-2013 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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