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http://hdl.handle.net/1843/LFSA-7T6NZC| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Marcação de antiveneno escorpiônico com tecnécio-99m e a suabiodistribuição em ratos de 21-22 dias |
| Authors: | Dayana Sampaio Cardoso |
| First Advisor: | Elziria de Aguiar Nunan |
| First Referee: | Consuelo Latorre Fortes-dias |
| Second Referee: | Maria Elena de Lima Perez Garcia |
| Abstract: | A freqüência com que ocorrem acidentes por escorpiões em algumas regiões do Brasil constitui um problema de saúde pública, principalmente em Minas Gerais e São Paulo. A espécie Tityus serrulatus, o escorpião amarelo, é considerada a mais venenosa daAmérica do Sul, devido à alta toxicidade do seu veneno, sendo acidentes com crianças os mais graves. A imunoterapia, considerada o único tratamento realmente específico para o envenenamento, tem sido vista por vários pesquisadores e estudiosos como indispensável, mas ineficiente para outros, principalmente em relação à prevenção ebloqueio das manifestações cardiovasculares induzidas pelo veneno, que acometem crianças. A tityustoxina, uma das proteínas mais tóxicas do veneno do escorpião T. serrulatus, se distribuiu diferentemente no organismo de ratos adultos (150-160 dias) e de ratos jovens (21-22 dias). Considerando-se a ausência de informações sobre abiodistribuição do antiveneno escorpiônico em animais jovens, efetuou-se a marcação do antiveneno produzido pela Fundação Ezequiel Dias (Funed) com 99mTecnécio e realizou-se estudos de biodistribuição do mesmo em ratos jovens (21-22 dias). A marcação foi feita empregando-se dois agentes redutores, o cloreto estanoso e oborohidreto de sódio. A purificação do produto marcado foi feita por filtração usando membrana de éster de celulose. Foi obtido um rendimento de marcação com 99mTecnécio de 98,32±0,69%, após purificação. O rendimento de marcação permaneceu constante após incubação com PBS pH 7,4 a 37°C por até 24 h, indicandoestabilidade do soro marcado por no mínimo 24 h. A manutenção da atividade do antiveneno após marcação com 99mTc foi verificada in vivo e in vitro. In vivo a potência foi determinada e comparada com a do antiveneno não marcado. Não se observou diferença estatística significativa entre as potências do antiveneno não marcado (1,21mg/mL) e marcado (1,12 mg/mL). In vitro, a manutenção da imunorreatividade de 99mTc- F(ab)2 foi verificada usando cromatografia de imunoafinidade, e esta apresentou ligação específica com o veneno. As condições de marcação não promoveram fragmentação do anticorpo como demonstrado por eletroforese SDS-PAGE. O processo de marcação foi eficiente e o antiveneno marcado com 99mTecnécio pôde ser utilizado com segurança nos estudos de biodistribuição. A captação do antiveneno escorpiônico marcado com 99mTc nos órgãos de ratos de 21-22 dias foi maior no rim, seguido do baço, fígado, coração, pulmão, tireóide e cérebro. Apesar de não esperado, observousecaptação da fração específica pelo cérebro. As AUC 0 - 24 h dos rins e sangue foram bem maiores e a do cérebro bem menor quando comparadas com as dos outros órgãos. O único órgão que apresentou valor de Kp maior que um foi o rim. Esses resultados indicam que o antiveneno permanece mais tempo no sangue e que suaeliminação deve ser via renal. Foram verificadas diferenças quando foram comparados os perfis de captação de F(ab)2 antiescorpiônica e da tityustoxina nos mesmos órgãos de animais jovens. A comparação dos valores de tmáx e Kp para F(ab)2 e para tityustoxina mostrou que a F(ab)2 antiescorpiônica se distribui mais lentamente para osórgãos. Após 24 horas de administração da fração específica, esta ainda está em fase de decaimento, em contraposição com o veneno que já foi quase completamente eliminado. Verificou-se que F(ab)2 se distribui do sangue para os órgãos alvos do envenenamento, inclusive o cérebro, porém em quantidades e tempos diferentes do veneno o que poderá comprometer a eficácia da neutralização dependendo daconcentração da fração que se liga especificamente ao veneno e o tempo decorrido após a picada. |
| Abstract: | The frequency that accidents with scorpions occur in some regions of Brazil constitutes a problem of public health, mainly in Minas Gerais and São Paulo. The species Tityus serrulatus, the yellow scorpion, is considered the most venomous of South America, due to high toxicity of its venom, showing serious damage in accidents with children. Theimmunotherapy, considered the only specific treatment for the envenomation, has been considered for some researchers as indispensable, but inefficient for others in relation to the prevention and blockade of venom-induced cardiovascular manifestations, mostly inchildren. Due to the tityustoxin, the highest venom toxic protein of T. serrulatus, shows different body distribution between adult rats (150-160 days-old) and young rats (21-22 days-old), and the absence of information about body distribution of the antivenom in young animals, the antivenom produced by Fundação Ezequiel Dias (Funed) waslabeled with 99mTechnetium to study of body distribution in young rats (21-22 days-old). The labeling was made using two reducing agents, the stannous chloride and sodium borohydride. The purification was made by filtration using cellulose ester membrane. A labeling yield of 98.32±0.69% was obtained after the purification. The labeling yield afterincubation with PBS pH 7.4 at 37 °C remained constant showing that stability of 99mTc- F(ab) 2 was preserved. The maintenance of the antivenom activity after labeling with 99mTc was verified in vivo and in vitro. In vivo, the potency was determined and compared with unlabeled antivenom. It was not observed any statistical difference between potencies of unlabeled (1.21 mg/mL), and labeled (1.12 mg/mL) antivenom. In vitro the immunoreactivity of 99mTc-F(ab)2 was verified using affinity chromatograph. 99mTc-F(ab)2 presented specific bound with venom. The process of labeling did not cause protein fragmentation as demonstrated by SDS-PAGE electrophoresis. The labeling process was efficient and the technetium99m labeled scorpion antivenomcould be safely used for body distribution studies. The labeled scorpion antivenom in 21- 22 days-old rats reached a maximum uptake in kidneys, followed by spleen, liver, heart, lung, thyroid and brain. The uptake of the specific fraction was unexpectedly observed in brain. AUC 0 - 24 h were larger to kidneys and blood, and smaller to brain when comparedwith other organs. Just kidneys showed value of Kp larger than one. These results indicated that the antivenom stays more time in blood and has a renal elimination. Differences were verified between profiles of uptake of F(ab')2 and of the tityustoxin in the same organs of young animals. The comparison of the tmax values and Kp for F(ab')2and tityustoxin showed that F(ab')2 is distributed slower for the organs than the tityustoxin. The decline phase still is happening after 24 hours of specific fraction administration, differently of the venom that was almost completely eliminated. In conclusion, F(ab')2 was distributed from the blood to target organs of the envenomation, including the brain, however in different amounts and periods than the venom. It may compromise the antivenom effectiveness, depending on the concentration of the fractionthat specifically binds to the venom and the time elapsed after the sting. |
| Subject: | Escorpião Veneno Imunoterapia Tityus serrulatus Radioisótopos Toxicologia Farmácia |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/LFSA-7T6NZC |
| Issue Date: | 12-Feb-2007 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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