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http://hdl.handle.net/1843/LGPD-7TWGHH| Type: | Tese de Doutorado |
| Title: | Caracterização molecular e imunológica do veneno de Tityus fasciolatus e sua ação sobre camundongos |
| Authors: | Priscylla Tatiana Chalfun Guimaraes |
| First Advisor: | Marilia Martins Melo |
| First Co-advisor: | Zelia Ines Portela Lobato |
| metadata.dc.contributor.advisor-co2: | Jenner Karlisson Pimenta dos Reis |
| First Referee: | Fernando Antonio Bretas Viana |
| Second Referee: | Fabiola de Oliveira Paes Leme |
| Third Referee: | Sandro César Salvador |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Giovanna Ivo Andrade |
| Abstract: | Objetivou-se estudar o veneno do escorpião da espécie Tityus fasciolatus, encontrada no Brasil Central, por meio da caracterização molecular, determinação, da dose letal e sua ação refletida nos componentes hematológicos, bioquímicos, anatomo-histopatológicos e imunológicos, utilizando-se o camundongo como modelo experimental. Sessenta camundongos Swiss CF1, machos (18-20g) foram utilizados para determinar a DL50 do veneno bruto de T. fasciolatus por via subcutânea (SC). Durante o desafio da DL50, foi realizado o exame anátomo-histopatológico dos animais que vieram a óbito. Para o estudo do perfil hematológico e da bioquímica sanguínea foram utilizados cinquenta camundongos Swiss CF1, machos, 30g distribuídos em três grupos (n=18), inoculados via SC com 50µl de PBS (G1), 24µg de veneno de T. fasciolatus (G2) e 8µg veneno de T. serrulatus (G3). Cada grupo foi subdividido em três subgrupos (n=6) de acordo com o momento da coleta de sangue, que foi feita 1, 8 e 24h após a inoculação do veneno, e realizados hemograma e dosagem de cortisol, uréia, creatinina, creatina quinase e isoenzima MB, aspartato aminotransferase, lactato desidrogenase, amilase, glicose, proteínas totais e frações. A avaliação molecular foi realizada pela extração e purificação do RNA e técnica de RT-PCR, tendo como moldes iniciadores oriundos da sequência de toxinas do veneno de T. serrulatus. Foi utilizada a técnica de SDS-PAGE e Western Blotting para verificação do perfil protéico das proteínas e reação antigênica cruzada entre as toxinas dos venenos e, a capacidade de neutralização do soro anti-T. serrulatus contra o veneno de T. fasciolatus. A DL50 do veneno de T. fasciolatus para camundongo foi de 59,65µg/camundongo. Foram observadas alterações histopatológicas no coração, pulmão e cérebro dos camundongos que vieram á óbito. O veneno de T. fasciolatus, na dose de 24µg, causou piloereção, comportamento nociceptivo, secreção nasal e oral acentuadas, dispnéia, prurido na face, reflexos exacerbados, policitemia e leucocitose com linfocitose. O veneno de T. fasciolatus mostrou similaridade ao veneno de T. serrulatus, reatividade e neutralização cruzadas. A metodologia adotada, utilizando iniciadores desenhados a partir do veneno de T. serrulatus e RT-PCR, se mostrou eficaz para o isolamento e obtenção de clones contendo sequências correspondentes aos transcritos de mRNA presentes na glândula de veneno de T. fasciolatus, como a identificação de Tf1, Tf3 e Tf4a. O soro anti-T. serrulatus foi capaz de neutralizar o veneno de T. fasciolatus no estudo in vivo |
| Abstract: | The aim of the study was to investigate the specie Tityus fasciolatus scorpion found in the Central of Brazil. This study was performed through molecular characterization, lethal dose and biochemical, anatomo-histopathological and immunological alterations in mice. Sixty Swiss CF1 mice, male, (18-20kg) were used to determine lethality assays T. fasciolatus (LD50) by subcutaneous injection (SC). The anatomo-histopathological examination was performed with the animals who died during the lethality assays (LD50). To study the blood profile and biochemistry fifty Swiss CF1 mice, male, 30g were used divided into three groups (G) (n= 18) SC with: 50l of PBS (G1), 24g of venom of T. fasciolatus (G2) and 8g venom of T. serrulatus (G3). Each group was subdivided into three subgroups (n = 6) according to the time of blood sample was taken at 1h , 8h and 24h after inoculation of the venom. It was investigated blood profile and levels of cortisol, urea, creatinine, creatine kinase, MB isoenzyme, aminotransferase aspartate, lactate dehydrogenase, amylase, glucose, total protein and fractionated. The molecular characterization was evaluated by molecular extraction and purification of RNA and RT-PCR technique with primers from the sequencie of toxin from venom of T. serrulatus. The antigenic cross-reaction between the toxins of venoms and neutralization ability the anti-T. serrulatus against that of the T. fasciolatus was determined by using the Western Blotting technique. The protein concentration was determined by SDS-PAGE. The LD50 of the venom of T. fasciolatus for mice was 59.65mg. Histopathological changes were observed in heart, lung and brain of mice who died. The venom of T. fasciolatus at a dose of 24g caused piloerection, nocioceptive behavior, nasal and oral sharp, dyspnoea, itching on the face and reflexes exacerbated, polycythemia, leukocytosis with lymphocytosis. The venom of T. fasciolatus showed similarity with the venom of T. serrulatus, reactivity and cross-neutralization. The methodology with primers from the venom of T. serrulatus and RT-PCR was effective for the isolation and obtain clones containing sequences corresponding to the mRNA transcripts from the venom gland of T. fasciolatus such as Tf1, Tf3 and Tf4a. In the neutralization assays the antivenon anti-T. serrulatus was able to effectively neutralize the venom of T. fasciolatus |
| Subject: | Escorpião Veneno Hematologia Envenenamento Camundongo como animal de laboratório |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/LGPD-7TWGHH |
| Issue Date: | 19-Feb-2009 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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