Detecção de Listeria monocytogenes em leite: sensibilidade e especificidade de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR)

Nadia David Peres

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DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor1	Monica Maria O Pinho Cerqueira	pt_BR
dc.contributor.referee1	Marcelo Resende de Souza	pt_BR
dc.contributor.referee2	Carla Christine Lange	pt_BR
dc.creator	Nadia David Peres	pt_BR
dc.date.accessioned	2019-08-10T06:34:45Z	-
dc.date.available	2019-08-10T06:34:45Z	-
dc.date.issued	2007-03-02	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/1843/MOLE-7EDJT7	-
dc.description.abstract	The aim of this work was to detect Listeria monocytogenes added in milk, after selectiveenrichment period, by PCR technique. A PCR technique using the primers LM1/LM2 and amultiplex PCR with IAP1/IAP2 e LMA/LMB was standardized. The conventional method of L.monocytogenes detection was compared from milk samples with different bacterial count addedwith various L. monocytogenes concentrations. The DNA extraction methods using phenolchloroformand thermal split were compared. The DNA extraction and the conventionalmethods showed the same result in detecting the bacterium in samples of sterilized milk. In milksamples with any initial contamination, the conventional methodology was sensitive and PCRfrom enrichment broth can not detect L. monocytogenes added, independently of the extractionmethod used. The identification time of L. monocytogenes decreased using the DNA extractionby the strain split method using suspect colonies that grew in Oxford and PALCAM, insubstitution of identification phenotypes tests	pt_BR
dc.description.resumo	O objetivo deste trabalho foi detectar Listeria monocytogenes inoculada em leite, após um período de enriquecimento seletivo, por meio da técnica de PCR. Foi feita a padronização de uma PCR utilizando os oligonucleotídeos LM1/LM2 e de uma PCR multiplex com osoligonucleotídeos IAP1/IAP2 e LMA/LMB. Listeria monocytogenes foi inoculada em várias concentrações em leite esterilizado desnatado e em leite cru integral com dois níveis diferentes de contaminação. A PCR padronizada foi aplicada para identificar a bactéria inoculadaexperimentalmente e foi comparada com o método convencional de detecção de L. monocytogenes. Foram comparados, também, os métodos de extração de DNA utilizando fenolclorofórmio e por lise térmica, a partir de um caldo de cultura e diretamente da colônia suspeita. Somente foi possível identificar L. monocytogenes por PCR no leite esterilizado desnatado, após 48 horas de enriquecimento em meio seletivo (LEB). Neste caso, a sensibilidade do teste foi de 1 UFC/ml de leite, a mesma sensibilidade da metodologia convencional. Quando inoculada em leite cru integral com contaminação bacteriana, L. monocytogenes só foi detectada pela metodologia convencional, com uma sensibilidade de até 2 UFC/ml (leite com baixa contaminação). Foi possível reduzir o tempo de identificação de L. monocytogenes, substituindo os testes fenotípicos de identificação pela PCR padronizada, utilizando DNA bacteriano extraído pelo método de lise térmica, diretamente da colônia suspeita	pt_BR
dc.language	Português	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal de Minas Gerais	pt_BR
dc.publisher.initials	UFMG	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	leite cru	pt_BR
dc.subject	reação em cadeia de polimerase	pt_BR
dc.subject	Listeria monocytogenes	pt_BR
dc.subject	qualidade de leite	pt_BR
dc.subject.other	Leite Análise	pt_BR
dc.subject.other	Listeria Identificação	pt_BR
dc.subject.other	Reação em cadeia de polimerase	pt_BR
dc.title	Detecção de Listeria monocytogenes em leite: sensibilidade e especificidade de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR)	pt_BR
dc.type	Dissertação de Mestrado	pt_BR
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