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metadata.dc.type: Tese de Doutorado
Title: Caracterização imunoquímica e molecular da fração dermonecrótica do veneno da aranha marrom Loxosceles intermedia
metadata.dc.creator: Juliana Ferreira de Moura
metadata.dc.contributor.advisor1: Carlos Delfin Chavez Olortegui
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Evanguedes Kalapothakis
metadata.dc.contributor.referee1: ELIO HIDEO BABA
metadata.dc.contributor.referee2: HELIDA MONTEIRO ANDRADE
metadata.dc.contributor.referee3: SILVIO SANCHES VEIGA
metadata.dc.contributor.referee4: Silvia Carolina Guatimosim Fonseca
metadata.dc.description.resumo: Com o objetivo de investigar a bioquímica e a imunoquímica de proteínas presentes no veneno de L. intermedia, treze anticorpos monoclonais foram produzidos e, um deles, denominado LimAb7, foi capaz de neutralizar a atividade dermonecrótica induzida por esta peçonha em coelhos. Para caracterizar as proteínas reconhecidas poreste anticorpo monoclonal, diferentes técnicas foram empregadas como, por exemplo, eletroforese bidimensional, ensaios de neutralização das atividades hemolíticas e esfingomielinásicas, técnica de Spot-synthesis, Phage display e imunosseleção de uma biblioteca de cDNA da glândula do veneno de L. intermedia. Através de um Western Blotting feito a partir de um gel bidimensional do veneno bruto de L. intermedia, verificou-se que LimAb7 reconheceu, pelo menos, 15 proteínas que fazem parte da família das proteínas da fração dermonecrótica. Além disso, foi capaz de inibir 84 % e 63,5% das atividades hemolíticas e esfingomielinásicas induzidas pelo veneno, in vitro, respectivamente. Quanto à técnica de Phage display, todos os mimotopos selecionados pelo LimAb7 apresentaram uma porção hidrofílica flanqueada por duas cisteínas, alguns dados sugerem que este anticorpo monoclonal apresenta efeito neutralizante pelaligação a um determinante antigênico dependente de conformação. Neste trabalho, ainda foram identificadas duas seqüências de aminoácidos a partir de uma biblioteca de cDNA da glândula de veneno de L. intermedia. A análise das mesmas revelou que as proteínasdeduzidas, ambas com 283 aminoácidos, são isoformas que apresentam 46 e 47,5% de similaridade com a LiD1. As massas moleculares das proteínas são de 32.036 e 32.180 Da e seus pontos isoelétricos teóricos 6.36 e 5.94, respectivamente.
Abstract: To investigate the biochemistry and the immunochemistry of proteins from L. intermedia spider venom, thirteen monoclonal antibodies were produced. On of them,called LimAb7, was able to neutralize the dermonecrotic activity induced by venom in rabbits. In an effort to characterize the proteins recognized by the neutralizing monoclonal antibody, we have used different approaches as two-dimensionalelectrophoresis, neutralizing assay of hemolytic and a sphingomyelinase activities, Spot peptide synthesis, Phage display technology and immunoscreening of L. intermedia venom gland cDNA library. In an Western Blotting of L. intermedia venom 2D electrophoresis gel, the LimAb7 reacted strongly with at least 15 proteins that can belong to proteins family from dermonecrotic portion. Furthermore, LimAb7 was able to inhibit 84% and 63.5% of hemolytic and sphingomyelinase activities induced by crude venom. By phage display, all peptide mimotopes screened by LimAb7 expressed a hydrophilic portion flanked by two cysteines, these findings have suggested that this monoclonal antibody mediates their neutralizing effect by binding to conformationaldependent antigenic determinant. Two clones from L. intermedia venom gland cDNA library have identified by immunoscreening using LimAb7. The sequence analysis revealed these proteins, both wiht 283 amino acids, are isoforms with 46 and 47,5% of similarity with LiD1. The molecular weight of 32.036 and 32.180 Da and their theoricalisoelectric points are 6.36 and 5.94, respectively.
metadata.dc.subject.other: Aranha Veneno
Farmacologia bioquímica
Loxosceles
Farmacologia
Imunoquimica
metadata.dc.language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
metadata.dc.publisher.initials: UFMG
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-6W8GSE
Issue Date: 16-Jun-2005
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