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http://hdl.handle.net/1843/SMOC-7DQNEM| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Efeito da toxina PhTx3-4 do veneno de Phoneutria nigriventer nos níveis de Ca2+ intracelular na exocirose em sinaptosomas |
| Authors: | Celio Jose de Castro Junior |
| First Advisor: | Marcus Vinicius Gomez |
| First Co-advisor: | Cristina Guatimosim Fonseca |
| First Referee: | Grace Schenatto Pereira |
| Second Referee: | Andre Ricardo Massensini |
| Abstract: | O influxo de cálcio e a exocitose de vesículas sinápticas no terminal nervoso são eventos chave na neurotransmissão. A entrada de cálcio, em resposta a um estímulo despolarizante, através de canais de cálcio regulados por voltagem é o principal sinal que dispara a ativação da maquinaria exocitótica e consequente liberação de neurotransmissores. A existência de diferentes subtipos de canais de cálcio regulados por voltagem com funções fisiológicas distintas motiva a busca de novos agentes farmacológicos atuantes sobre estes canais. O veneno da aranha brasileira Phoneutria nigriventer contém uma variedade de substâncias com ação predominantemente neurotóxica, dentre elas a fração PhTx3-4 foi recentemente descrita como uma potente bloquadora da neurotransmissão em diversos modelos experimentais. Para testar o efeito dessa toxina nas alterações intracelulares da concentração 2+]) induzidas por KCl, terminais nervosos centrais isolados de cálcio ([Ca(sinaptosomas) foram marcados com a sonda fluorescente Fura 2-AM. A 2+PhTx3-4 reduziu a [Ca] induzida por KCl de uma forma dependente da dose encontrado inibindo 53% desse efeito em concentrações saturantes. O IC502+para o efeito inibitório da Tx3-4 na [Ca ] foi de 1,4 nM. As toxinas bloqueadoras de canais de cálcio -conotoxina MVIIC, -conotoxina GVIA e -agatoxina IVA reduziram por 47, 22 e 24%, respectivamente, o aumento na 2+] induzida por KCl. Em associação à PhTx3-4, somente a -agatoxina IVA [Ca2+mostrou efeito inibitório aditivo no aumento da [Ca] induzida por KCl. Para investigar o efeito da PhTx3-4 na exocitose de vesículas utilizamos a sonda fluorescente FM2-10. A PhTx3-4 também reduziu com elevada potência (IC = 501,1 nM) a exocitose induzida por KCl, efeito comparativamente maior que o das toxinas -conotoxina MVIIC, -conotoxina GVIA e -agatoxina IVA. Tal como ocorreu nas medidas de cálcio intracelular, somente a -agatoxina IVA apresentou efeito aditivo inibitório com a PhTx3-4 na exocitose induzida por KCl. Juntos esses dados mostram que PhTx3-4 é um potente inibidor de canais de cálcio Tipo-P/Q envolvidos no controle da entrada de cálcio e exocitose de vesículas sinápticas em sinaptosomas cérebro-corticais. |
| Abstract: | Calcium influx and synaptic vesicle exocytosis at nerve terminals are key events in the neurotransmission. Calcium entrance throughout voltage-gated calcium channels in response to a depolarizing stimulus is the main signal that triggers the exocytotic machinery leading to neurotransmitter release. Existence of multiple subtypes of voltage-gated calcium channels with distinct physiological functions has leading to the search for new pharmacological agents that act on these channels. Venom of the brazilian spider Phoneutria nigriventer contains several substances with action markedly neurotoxic. Amongst them the fraction PhTx3-4 has been show to be a potent blocker of neurotransmission at various experimental models. To test for the effect of 2+PhTx3-4 on the calcium concentration changes ([Ca ]) induced by KCl, isolated central nerve endings (synaptosomes) were stained with the 2+fluorescent probe Fura 2-AM. PhTx3-4 reduces the [Ca ] induced by KCl in a dose dependent way, reducing by 53% this effect at saturating concentrations. 2+IC found for the PhTx3-4 effect on KCl induced changes in [Ca ] was 1,4 nM.50 The calcium blockers toxins -conotoxin MVIIC, -conotoxin GVIA and -2+ agatoxin IVA reduced by 47, 22 e 24% respectively the changes in [Ca ] induced by KCl. In association with PhTx3-4, only -agatoxin IVA showed an 2+ addictive inhibitory effect on the KCl induced [Ca ] increase. To test for the PhTx3-4 effect on vesicle exocytosis, we used the fluorescent probe FM2-10. PhTx3-4 also reduces with great potency (IC50 = 1,1 nM) the KCl induced exocytosis. This effect was comparatively stronger than that observed with - conotoxin MVIIC, -conotoxin GVIA and -agatoxin IVA. As like as in the calcium measurements, only -agatoxin IVA showed an addictive inhibitory effect on the KCl induced exocytosis. Taken together these data show that PhTx3-4 is a potent inhibitor of P/Q calcium channels involved in controlling calcium entry and exocytosis of synaptic vesicles in brain cortical synaptosomes. |
| Subject: | Toxinas Transmissão nervosa |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/SMOC-7DQNEM |
| Issue Date: | 20-Sep-2007 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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