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http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9J2NYG| Type: | Tese de Doutorado |
| Title: | Dantrolene e células-tronco mensenquimais no tratamento do trauma medular agudo em ratos Wistar |
| Authors: | Bruno Benetti Junta Torres |
| First Advisor: | Eliane Goncalves de Melo |
| First Co-advisor: | Rubens Antonio Carneiro |
| metadata.dc.contributor.advisor-co2: | Milene Alvarenga Rachid |
| First Referee: | Alexandre Mazzanti |
| Second Referee: | Milene Alvarenga Rachid |
| Third Referee: | Geraldo Eleno Silveira Alves |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Ana Carolina Mortari |
| Abstract: | Objetivou-se avaliar o efeito do dantrolene (DAN) e das células-tronco mesenquimais (CTM) no trauma medular agudo (TMA). Foram utilizados 60 ratos Wistar, machos com três meses de idade, divididos nos grupos CTM, DAN + CTM, DAN, controle positivo (CP) (trauma e placebo) e controle negativo (CN) (sem trauma e placebo). Realizou-se laminectomia de T12 em todos os grupos, seguida de TMA contusivo compressivo, com exceção do grupo CN. Uma hora depois, os grupos DAN + CTM e DAN receberam 10mg/kg de DAN em dose única, por via intraperitoneal e, após sete dias, os grupos CTM e DAN + CTM receberam 1x106 células, por via intravenosa. Testes comportamentais foram realizados para avaliar a recuperação funcional, por meio da escala de BBB e pelo método de escala descritiva adaptada, durante 30 dias. Para avaliação da medula espinhal foram realizadas histologia em H.E., imunoistoquímica com anti-NeuN e RT-PCR em tempo real para avaliar a expressão gênica dos fatores neurotróficos (BDNF e NT-3) e das proteínas antiapoptóticas (Bcl-2 e Bcl-xl) e pró-apoptóticas (caspase-3, caspase-9 e Bax), nos segmentos craniais e caudais ao epicentro da lesão. Os animais traumatizados apresentaram paraplegia grave e retenção urinária com cistite hemorrágica. Houve recuperação funcional significativa nos grupos tratados com CTM, DAN ou associação (p<0,05) em comparação ao grupo CP. Histologicamente, observou-se lesão espinhal grave, caracterizada por degeneração axonal e perda neuronal, estendendo-se craniocaudalmente ao epicentro. Todos os grupos apresentaram maior número médio de neurônios NeuN-positivos que os do CP (p<0,05). O TMA resultou em diminuição da expressão de BDNF, NT-3 e Bcl-xl, e aumento da expressão de caspase-3 e Bax em relação às medulas espinhais de animais do CN. Após o tratamento, observou-se aumento significativo da expressão de BDNF nos grupos CTM, CTM + DAN e DAN em relação ao grupo CP (p<0,05). Já a expressão da NT-3, mostrou-se maior nos grupos CTM + DAN e DAN nos segmentos craniais (p<0,05), e DAN nos caudais (p<0,01). A expressão de Bax foi significativamente menor nos grupos CTM + DAN (p<0,05) e DAN (p<0,001). A expressão das caspases 3 e 9 foi significativamente menor nos grupos DAN, CTM e CTM + DAN (p<0,05). Conclui-se que o DAN, as CTM ou associação de ambos, para tratamento de TMA em ratos, são protocolos seguros, promovem recuperação funcional e efeitos neuroprotetores, neurotróficos e antiapoptóticos.. |
| Abstract: | This study aimed to evaluate the effects of dantrolene (DAN) and mesenchymal stem cells (MSCs) in acute spinal cord injury (SCI). Sixty three-months-old male Wistar rats were divided into groups MSCs, MSCs + DAN, DAN, positive control (PC) (trauma and placebo) and negative control (NC) (no trauma and placebo). Laminectomy was performed at T12 level in all animals, followed by a weight-drop model of SCI, except for the NC group. An hour later, the MSCs + DAN and DAN groups received 10mg/kg of DAN in a single dose, intraperitoneally, and after seven days, the MSCs and MSCs + DAN groups received 1x106 cells intravenously. Functional recovery was assessed through BBB and adapted descriptive scale methods for 30 days. Spinal cord was evaluated with H.E., immunoistochemistry with anti-NeuN, and real time RTPCR to assess gene expression of neurotrophic factors (BDNF and NT-3), antiapoptotic (Bcl-2 and Bcl-xl) and pro-apoptotic proteins (caspase-3, caspase-9 and Bax), in the cranial and caudal segments from the lesion epicenter. Traumatized animals showed severe paraplegia and urinary retention with hemorrhagic cystitis. There was a significant recovery in groups MSCs, DAN and MSCs + DAN (p<0.05) compared to PC. Histologically, there was no systemic changes. It was observed severe spinal injury, characterized by axonal degeneration and neuronal loss, which extended cranio-caudally from epicenter. All groups showed average number of NeuN-positive neurons significantly higher when compared to PC (p<0.05). The SCI resulted in reduced BDNF, NT-3 and Bcl-xl gene expression, and increased Bax and caspase-3 expression. After treatments, there was a significant increase in BDNF expression in MSCs, MSCs + DAN and DAN groups compared to PC group (p<0.05). The NT-3 expression was higher in MSCs + DAN and DAN groups in cranial segments (p<0.05), and DAN group in the caudal ones (p<0.01). The Bax expression was significantly lower in the MSCs + DAN (p<0.05) and DAN (p<0.001). The caspase-3 and 9 expression were significantly lower in DAN, MSCs and MSCs + DAN groups (p<0.05). It was concluded that DAN, MSCs or the combination of both for the treatment of SCI in rats promote functional recovery and neuroprotection through neurotrophic and antiapoptotic effects. |
| Subject: | Rato como animal de laboratório Medicamentos Administração Traumatismos da medula espinhal |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9J2NYG |
| Issue Date: | 28-Feb-2014 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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