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Type: Dissertação de Mestrado
Title: Avaliação de alternativas ao uso do soro fetal bovino na adaptação de cultivos celulares e obtenção e caracterização das células de córnea bovina (CORBOV
Authors: Agda de Moraes Leite
First Advisor: Jenner Karlisson Pimenta dos Reis
First Co-advisor: Graciela Kunrath Lima
First Referee: Marcelo Fernandes Camargos
Second Referee: Zelia Ines Portela Lobato
Abstract: Meios para cultivo celular, com diferentes aportes nutritivos, foram criados e aperfeiçoados ao longo dos anos buscando fornecer as condições para a proliferação celular in vitro. O soro de origem animal (SA) é o suplemento comumente adicionado ao meio, como principal fonte de hormônios, como por exemplo, os fatores de crescimento. Foram testados como substitutos ao soro fetal bovino (SFB) na adaptação das células VERO e MDBK, o hidrolisado de soja e o meio Virus Production Serum Free Medium (VP-SFM), produtos que não utilizam qualquer insumo de origem animal ou humana para sua obtenção. Em ambos os meios, as células apresentaram o mesmo padrão de proliferação celular que o meio suplementado com SFB.Células da córnea bovina (CorBov) foram obtidas através do cultivo primário e mantidas por vinte e quatro passagens. As células mantiveram sua morfologia e capacidade de proliferação após a recuperação da alíquota mantida a -196ºC em nitrogênio líquido. A célula CorBov apresentou morfologia alongada e núcleos elípticos, características presentes nos fibroblastos. Na avaliação do padrão de proliferação celular observou-se um aumento gradual no número de células ao longo de 30 dias mesmo quando o meio de cultivo não foi substituído. Foi possível manter as células CorBov ao longo deste período em Meio Essencial Mínimo (MEM) suplementado com apenas um, dois, cinco ou dez por porcento de SFB, dentre as concentrações testadas. Na caracterização imunocitoquímica a população celular foi marcada positivamente pela vimentina, demonstrando sua origem mesenquimal. As células de córnea foram permissíveis a replicação dos vírus da Diarreia viral Bovina (BVDV) e o Herpesvirus tipo I (BoHV-1) evidenciado pela presença de efeito citopático com áreas de lise celular e prolongamentos citoplasmáticos; e grumos de células esféricas formando estruturas em cacho de uva, respectivamente para cada vírus. O vírus BoHV-1 apresentou o mesmo padrão de replicação em células CorBov do quando comparado ao padrão de replicação em células MDBK.
Abstract: Media for cell culture, with different nutritional intakes were created and improved over the years seeking to provide the conditions for in vitro cell proliferation. The serum of animal origin (SA) is commonly added to the medium as the main source of hormones, such as growth factors. The soy hydrolyzate and the medium Virus Production Serum Free Medium (VP-SFM), that do not use any input of animal or human origin were tested as substitutes to fetal bovine serum (FBS) in adaptation of VERO and MDBK cells. In both media, the cells showed the same pattern of cell proliferation compared to the medium supplemented with SA.Bovine corneal cells (CorBov) were obtained from primary culture and maintained for twenty-four passages. The cells retained their morphology and proliferation capacity after recovery from liquid nitrogen (-196ºC) storage. The CorBov cells presented elongated and elliptical core morphology, features present in fibroblasts. In the standard cell proliferation assessment there was a gradual increase in the cell number over 30 days even when the culture medium was not replaced. It was possible to maintain CorBov cells throughout this period with Minimal Essential Medium (MEM) supplemented with one, two, five or ten percent of SA. The CorBov cell population was positively marked by vimentin in Immunocytochemistry assay, demonstrating its mesenchymal origin. Corneal cells were permissible to Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) and Herpesvirus Type I (BoHV-1) evidenced by the presence of cytopathic effect such as cell lysis and cytoplasmic extensions; and spherical cell structures forming lumps bunch of grapes, respectively for each virus. The BoHV-1 showed the same pattern of virus replication in CorBov when compared to the standard (control) MDBK cells
Subject: Ciência Animal
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-A7XQMK
Issue Date: 2-Jun-2015
Appears in Collections:Dissertações de Mestrado

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