Use este identificador para citar ou linkar para este item:
http://hdl.handle.net/1843/SMOC-B2DJET| Tipo: | Tese de Doutorado |
| Título: | Identificação e análise molecular de isolados de Leptospira spp. de bovinos em Minas Gerais |
| Autor(es): | Maria Raquel Venturim Cosate |
| Primeiro Orientador: | Elvio Carlos Moreira |
| Segundo Orientador: | Joao Paulo Amaral Haddad |
| Primeiro Coorientador: | Jose Miguel Ortega |
| Primeiro membro da banca : | Cristiano Barros de Melo |
| Segundo membro da banca: | Monica Bucciarelli Rodriguez |
| Terceiro membro da banca: | Jenner Karlisson Pimenta dos Reis |
| Quarto membro da banca: | Ana Lúcia Tabet do Nascimento |
| Resumo: | A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial causada por bactérias classificadas no gênero Leptospira spp. Em bovinos é classificada como uma importante doença da reprodução associada com significativas perdas econômicas, especialmente em rebanho bovino leiteiro. Diante disso, este trabalho teve como objetivo realizar a classificação taxonômica de dois isolados bacterianos pertencentes ao gênero Leptospira spp mediante a caracterização sorológica e molecular das cepas bacterianas, assim como realizar a análise comparativa dos isolados regionais com cepas de referência diretamente associadas ao desenvolvimento da doença em humanos e cepas de importância veterinária. A classificação taxonômica do gênero Leptospira spp foi desenvolvida com a utilização de anticorpos monoclonais selecionados de acordo com histórico de prevalência da doença na região em estudo e aplicados na metodologia de microaglutinação para a determinação da classificação sorológica, na qual estão inclusos a caracterização de sorogrupo e sorovariedade. A microaglutinação indicou que os isolados denominados Lagoa e Bolívia pertencem ao sorogrupo Sejroe e sorovariedade Hardjo. A identificação da espécie das cepas em estudo foi realizada com a utilização de genes conservados, incluindo 16S rRNA ribossomal e secy, os quais confirmaram a classificação dos isolados na espécie Leptospira interrogans. No estudo comparativo das cepas regionais e de referência foram selecionados os genes ORF14, ORF15, ORF22, ORF36 localizados no lócus rfb, o qual é descrito estar associado a codificação de lipopolissacarídeos de membrana, genes associados a virulência do microrganismo, denominado LigB e elementos móveis do genoma, conhecidos como IS1533 e IS1500, com os quais foram realizadas quantificação do número de cópias distribuídas no genoma mediante aplicação da técnica de Real time PCR. As análises permitiram identificar diferenças significativas destes elementos móveis entre os isolados com idêntica classificação taxonômica. Também foram realizados sequenciamento parciais destes elementos, os quais sugeriram a ocorrência de transferência lateral entre cepas classificadas nas espécies Leptospira interrogans e Leptospira borgpetersenii pertencentes a sorovariedade Hardjo. A análise comparativa com o gene ORF22 permitiu a discriminação de cepas ao nível de sorogrupo e sorovariedade, enquanto a ORF36 mostrou-se única para cepas classificadas no genótipo hardjoprajitno. Por fim, o sequenciamento completo do genoma da cepa Norma permitiu a identificação diferenciada de genes associados à virulência entre cepas de Leptospira spp. Portanto, os ensaios desenvolvidos sugerem que estes genes podem contribuir na identificação, classificação e estudos moleculares epidemiológicos do gênero Leptospira spp. |
| Abstract: | Leptospirosis is caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira spp. This zoonotic disease is distributed globally and affects domestic animals, including cattle. In livestock production, Leptospira interrogans serogroup Sejroe serovar Hardjo and Leptospira borgpetersenii serogroup Sejroe serovar Hardjo remain important species associated with this reproductive disease. Previous studies on Brazilian livestock have reported that L. interrogans serovar Hardjo is the most prevalent leptospire agent in this country and that it is related to leptospirosis clinical signs, leading to economic loss in production. Here, we focused on describing the isolation of three clinical strains obtained from leptospirosis outbreaks. Serological and molecular typing using housekeeping genes (secY and 16SrRNA), rfb locus genes (ORF 14, ORF15, ORF22, ORF36), virulent gene (LigB) and mobile elements (IS1500 and IS1533) were applied for the identification and comparative analysis of Leptospira spp. Our results confirmed the isolation of L.interrogans serovar Hardjo in Brazilian livestock. Genetic analysis using ORF22 and ORF36 lead us to group leptospira into serogroup taxonomic degree of classification. Genetic approaches were also applied to compare leptospira strains using IS1500 and IS1533 copy number analysis. The results suggest genetic variability among L. interrogans serovars species of reference bacterial strains and clinical isolates, which may contribute to leptospirosis identification and bacterial genetic variability. Furthermore, the results allow us to identify our three isolates (Norma, Lagoa and Bolivia) as belonging to L. interrogans species. Finally, we performed the whole genome sequence of Norma strain and distinct virulence associated genes profile were detected. Those results may contribute to improving the identification and epidemiological studies of leptospirosis in livestock production. |
| Assunto: | Ciência animal |
| Idioma: | Português |
| Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Sigla da Instituição: | UFMG |
| Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/SMOC-B2DJET |
| Data do documento: | 6-Jul-2012 |
| Aparece nas coleções: | Teses de Doutorado |
Arquivos associados a este item:
| Arquivo | Descrição | Tamanho | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| maria_raquel_venturim_cosate.pdf | 2.65 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |
Os itens no repositório estão protegidos por copyright, com todos os direitos reservados, salvo quando é indicado o contrário.