Avaliação de uma estirpe não toxigênica para prevenção de diarreia neonatal em leitões por clostridioides ( clostridium ) difficile

Abstract

Clostridioides (Clostridium) difficile é um dos maiores causadores de diarreia neonatal em suínos e estudos tem apontado para um possível potencial zoonótico deste microrganismo. Apesar da importância do patógeno, não existem medidas específicas para a prevenção e controle da infecção por C. difficile (ICD). Desta forma, o objetivo do presente estudo foi caracterizar genotipicamente e avaliar o potencial de proteção de uma estirpe não toxigênica de C. difficile (NTCD), nomeada de Z31, contra a ICD em suínos. Para tal, o estudo foi dividido em cincoetapas: (1) Caracterização genotípica da estirpe Z31; (2) Avaliação da capacidade preventiva da estirpe Z31 contra a ICD em modelo experimental suíno; (3) Avaliação da capacidade preventivada estirpe Z31 contra a ICD em uma granja comercial; (4) Avaliação de cinco meios de cultura para a produção e esporulação da estirpe Z31; e (5) Avaliação da viabilidade temporal de esporos liofilizados da estirpe Z31. O sequenciamento genômico revelou que a estirpe Z31 possui umcromossomo circular de 4.298.263 pares de base (bp), contendo genes responsáveis por produção e estabilidade dos esporos (spo0A), aderência intestinal (slpA) e formação de biofilme (fliD), porém, ausência dos genes codificadores das toxinas. Em modelo experimental em suínos neonatos, a Z31 preveniu a ICD, reduzindo os sinais clínicos, as lesões macro e microscópicas e a eliminação fecal do agente. Em uma granja comercial, mesmo na presença de outros enteropatógenos, a Z31 reduziu a ocorrência de ICD, a eliminação fecal de C. difficile toxigênico e a ocorrência de diarreia neonatal suína. Os meios BHI e RCM proporcionaram as maiores taxas de crescimento in vitro da estirpe Z31, atingindo concentrações de 6,57 ×106 UFC/mL com proporção de esporos superiores a 98%. Quando liofilizada, a estirpe Z31 manteve uma viabilidade aceitável tanto em temperatura ambiente quanto resfriada, de forma que 40-50% da carga total ainda se encontrava viável após 2 anos de armazenamento. Como conclusão, a estirpe Z31 foi capaz de prevenir a ICD em suínos e demonstrou características desejáveis para o seu potencial uso comercial.