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Type: Dissertação de Mestrado
Title: Quantificação de cianobactérias produtoras de microcistina no reservatório de Furnas (MG), através da PCR em tempo real, e sua relação com fatores ambientais
Authors: Juliana da Silva Martins Pimentel
First Advisor: Alessandra Giani
First Referee: Marli de Fátima Fiore
Second Referee: Alvaro Cantini Nunes
Abstract: As cianobactérias são organismos procariontes, fotossintetizantes e podem ser encontradas em vários ambientes diferentes. Um dos sérios problemas relatados em águas eutrofizadas é a ocorrência freqüente de florações formadas por cianobactérias produtoras de toxinas. Devidoà impossibilidade de se diferenciarem cepas tóxicas e não tóxicas morfologicamente, marcadores moleculares foram desenvolvidos como possível instrumento de detecção de toxicidade. As cianobactérias produtoras de microcistina possuem um operon policistrônico denominado mcy, que tem sido usado como marcador molecular para detecção da toxicidade. No presente trabalho, amostras foram coletadas periodicamente no final de 2006, 2007 e início de 2008, em várias estações do reservatório de Furnas (MG), um grande reservatório doSudeste do Brasil. Ele é formado por dois rios principais (Rio Grande e Rio Sapucaí) e uma série de pequenos tributários. Novos iniciadores foram desenhados para a técnica da PCR convencional e da PCR quantitativa, objetivando a detecção dos genes mcyD em populaçõesnaturais. Foram realizadas análises físico-químicas e biológicas e análises moleculares para estudar quantitativamente as relações entre a existência de cepas tóxicas e os fatores ambientais. Os braços do Grande e do Sapucaí apresentam diferentes níveis tróficos. No braçodo Sapucaí, mais eutrófico, foi freqüentemente observada uma quantidade maior de cianobactérias. Os dados mostraram uma tendência sazonal. Alguns dados ambientais como clorofila, fósforo e ZE mostraram correlação com a quantidade de genótipos tóxicos no ambiente. Também a presença de genes mcyD pôde ser correlacionada positivamente com a presença de microcistina, mas nem sempre foram encontrados relações quantitativas diretas entre essas duas medidas. Com relação ao aspecto metodológico, podemos dizer que o métododa q-PCR mostrou-se sensível para quantificação e identificação da microcistina e, portanto poderia ser utilizado no monitoramento de cianobactérias. No entanto, mais estudos são necessários para verificar a existência da influência dos fatores ambientais na quantidade decianobactérias produtoras de microcistina no ambiente, pois nosso estudo não foi conclusivo sobre este aspecto.
Abstract: Cyanobacteria are photosynthetic prokaryotes found in different aquatic environments. A serious problem in eutrophic waters is the frequent occurrence of blooms of potential toxic cyanobacteria. Since species are sometimes difficult to identify and morphological features are not enough to separate toxic from non-toxic strains, molecular markers have beendeveloped as an instrument to detect toxicity. Microcystin-producing cyanobacteria have a polycistronic operon called mcy that has been used as a genetic tool for toxicity detection. In the present work, samples were collected between September 2006 and April 2008 at several stations in Furnas Reservoir (MG), a large reservoir in Southeastern Brazil. This reservoir is formed by two main rivers, Grande and Sapucaí, and a series of small tributaries. New primers were designed for the conventional PCR and for the quantitative PCR techniques, aiming the detection of mcyD genes in natural populations. Physical-chemical, biological andmolecular analyses were performed on the same sample to study the relationship among the existence of toxic strains and of the environmental factors. The Grande and Sapucaí branches showed different trophic levels. In the Sapucaí, which is more eutrophic, a large number ofcyanobacteria was frequently observed. Some tendency of sazonality was detected in the entire reservoir. It was possible to find some relationship between chlorophyll a, phosphorus and ZE and the amount of toxic genotypes in the environment. The presence of mcyD genes was also positively correlated with the presence of microcystin, but directly quantitative relationships between these two items were not always found. The methodology used for microcystin quantification and identification was very sensitive and it could be used in cyanobacteria monitoring programs. However, more studies are necessary to investigate the influence of environmental factors on the amount of microcystin-producing cyanobacteria in the environment.
Subject: Gene sintetase de microcistina mcyD
Botânica
Microcistinas
PCR quantitativa
Reação em cadeia de polimerase
language: Português
Publisher: Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials: UFMG
Rights: Acesso Aberto
URI: http://hdl.handle.net/1843/TJAS-8U3N9F
Issue Date: 6-Mar-2009
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