Please use this identifier to cite or link to this item:
http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8H5QQF| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Disfunção cardíaca em animal nocaute para o receptor do tipo 2 para bradicinina |
| Authors: | Danilo Roman Campos |
| First Advisor: | Jader dos Santos Cruz |
| First Referee: | Fabiana Simao Machado |
| Second Referee: | Paulo Sergio Lacerda Beirao |
| Abstract: | As bradicininas são importantes peptídeos moduladores da função cardiovascular. Elas atuam através da ativação de dois distintos receptores, receptores do tipo 1 e 2, denominados B1R e B2R. Esses receptores são acoplados a proteína G, ativando vias de sinalização intracelular. O papel que ambos desempenham na fisiologia cardíaca ainda é pouco conhecido. Por este motivo, decidimos estudar o animal nocaute para o B2R (B2R-/-), para averiguarmos o papel que este desempenha no controle da função cardíaca. Utilizando a técnica de Langendorff foi caracterizada uma redução na capacidade contrátil do coração isolado. Para melhor investigarmos os mecanismos envolvidos na disfunção cardíaca, estudamos os miócitos cardíacos isolados. Foi constatado que a capacidade contrátil, tanto de células isoladas do ventrículo direito como do esquerdo, apresentou redução significativa, bem como aumento no tempo para 50% da contração e relaxamento. Para caracterizarmos as propriedades elétricas das células isoladas do ventrículo esquerdo utilizamos a técnica de patch-clamp nos modos current- e voltage-clamp e foi constatado que, comparando-se o controle com o B2R-/- o potencial de ação apresenta uma duração maior; o potencial de repouso encontra-se mais despolarizado; a corrente de potássio retificadora de entrada (IK1) não está alterada; a corrente de potássio transiente de saída (Ito) encontra-se reduzida; a corrente de potássio retificadora de saída (Ik) não foi alterada e a corrente de cálcio do tipo L (ICa,L) foi atenuada. Além disso, os processos cinéticos da Ito e ICa,L foram, de uma forma geral, alterados. Avaliamos a liberação de Ca2+ pelo retículo sarcoplasmático através da técnica de microscopia confocal e constatamos que animais B2R-/- apresentam uma liberação fracional reduzida de Ca2+. Para caracterizarmos alterações na produção de espécies reativas do oxigênio avaliamos a produção basal de superóxido pelos cardiomiócitos e constatamos que os animais B2R-/- apresentam uma produção basal aumentada, quando comparados com os animais controle. Também averiguamos a participação do óxido nítrico (NO) na modulação da Ito, ICa,L e do transiente global de Ca2+. Constatamos que o NO é, em parte, responsável pela redução da Ito e ICa,L nos cardiomiócitos de animais B2R-/-, porém o NO não é responsável pela redução observada do transiente global de Ca2+. Tomando em conjunto, nossos dados indicam que os animais B2R-/- apresentam uma redução importante na função cardíaca, sendo este fenótipo devido, em parte, às alterações na eletrofisiologia das células cardíacas, na redução da liberação de Ca2+ dos estoques intracelulares (retículo sarcoplasmático) e no aumento da produção de superóxido. Além disso, as alterações encontradas devem-se provavelmente, a uma produção aumentada de óxido nítrico. Em suma, o fenótipo cardíaco apresentado pelos animais B2R-/- assemelha-se àquele encontrado na insuficiência cardíaca, indicando que os camundongos B2R-/- desenvolvem naturalmente esta patologia. |
| Abstract: | The Kinins are important peptides concerning control of cardiovascular function. Their action mechanism depend on the activation of two distinct receptor, type 1 and 2 bradykinin receptor (B1R and B2R). They both are coupled to G protein, which are responsible to activate different intracellular pathways, involved in different cellular process. Their role in the control of heart function is not well understood. Based on this issue, we decided to evaluate the heart physiology of mouse knockout to type 2 receptor of bradykinin (B2R-/-), in order to evaluate the B2R function in the heart physiology. Using langendorff technique we observed a reduced heart function, in terms of contraction. To evaluate the mechanism involved in the heart dysfunction, we used isolated cardiomyocyte. We evaluated the cellular contraction and both, left and right ventricular cardiomyocytes presented reduction in cell shorthening. Furthermore, time to 50% to contraction and relaxation were increased. In order to investigate the electrical properties of left ventricular cardiomyocyte in B2R-/-, we used patch-clamp technique in current and voltage-clamp mode. When comparing control and B2R-/- we observed: increased time to repolarization of action potential; increased resting potential; inward potassium rectification (IK1) is not altered; transient outward potassium current (Ito) was reduced; delay potassium current (Ik) was not altered and L-type calcium current (ICa,L) was attenuated. Besides, kinetics process concerning Ito and ICa,L, in a overall mean were altered. We evaluated calcium release from sarcoplasmatic reticulum using confocal microscope and we obtained a reduction in calcium release from sarcoplasmatic reticulum from B2R-/-. To characterize alterations in the production of reactive oxygen species we evaluate basal production of superoxide in cardiomyocyte and B2R-/- presented an increased production when comparing to control. We also investigated the participation of nitric oxide (NO) in modulate Ito, ICa,L and calcium release from sarcoplasmatic reticulum. We observed that NO is, in parts, responsible to the reduction in Ito and ICa,L in cardiomyocytes of B2R-/-. However NO is not responsible to the reduction in calcium transient. Taking together, our results indicate that B2R-/- mice present a reduction in heart function attributed to alterations in electrophysiology, calcium transient and generation of reactive oxygen species. Furthermore, the dysfunction presented is, in parts, due to excessive production of NO. In sum, the heart phenotype presented by B2R-/- mice is similar to many models of heart failure, indicating that B2R-/- mice develop spontaneous heart failure. |
| Subject: | Bioquímica Superóxido Receptor B2 de bradicinina Bradicinina |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8H5QQF |
| Issue Date: | 16-Feb-2009 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| resumo_dissertacao_final_danilo_roman_campos.pdf | 10.47 kB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.