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http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8H8KWS| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Estudo do envolvimento da enzima Formil-Transferase, codificada pelo gene wbkC, na biossíntese do LPS da Brucella Abortus e avaliação da persistência e potência de uma cepa mutante para este gene em camundongos C57BL/6 e deficientes para IRF-1 |
| Authors: | Thais Lourdes Santos Lacerda |
| First Advisor: | Sergio Costa Oliveira |
| First Referee: | Evanguedes Kalapothakis |
| Second Referee: | Ronaldo Alves Pinto Nagem |
| Abstract: | Brucella abortus é uma bactéria intracelular facultativa, Gram-negativa, que infecta animais domésticos e o homem, causando a brucelose. O LPS presente em sua membrana é um dos principais fatores de virulência. Esta estrutura determina a morfologia das colônias que podem ser lisas ou rugosas. Este trabalho tem como objetivo a inativação do gene wbkC, que codifica uma enzima formiltransferase envolvida na biossíntese do LPS, das linhagens selvagem e vacinal da B. abortus visando o desenvolvimento de uma nova cepa vacinal. Por recombinação homóloga dupla foram obtidos os mutantes B. abortus wbkC S2308 e B. abortus wbkC S19. A confirmação da mutação no gene wbkC foi avaliada pelas técnicas de PCR e Southern blot. As colônias destes mutantes apresentaram morfologia rugosa quando coradas com cristal violeta. Através da técnica de imunoblotting utilizando anticorpo específico para o LPS rugoso, o LPS das cepas mutantes foi reconhecido, porém com um padrão de bandas diferenciado do LPS liso das cepas parentais. Os mutantes obtidos foram avaliados em modelos animais em camundongos C57BL/6 e camundongos deficientes para o gene que codifica o fator regulador de interferon do tipo 1 (IRF-1(-/-)). As cepas mutantes da B. abortus apresentaram uma menor persistência quando comparadas com as cepas parentais B. abortus S2308 e S19, e uma virulência bastante semelhante à cepa vacinal RB51. A capacidade dos mutantes conferirem proteção ao desafio com a cepa selvagem B. abortus S2308 também foi avaliada. B. abortus wbkC S2308 induziu uma proteção em camundongos IRF-1(-/-) semelhante à observada naqueles animais vacinados com as cepas vacinais B. abortus S19 e RB51. Pode-se concluir que os mutantes da B. abortus para o gene wbkC apresentaram reduzida virulência quando comparados às linhagens selvagem e vacinais. Além disso, o mutante B. abortus wbkC S2308 induziu uma proteção em camundongos IRF(-/-) semelhante às cepas vacinais mostrando-se ser um candidato em potencial para compor uma vacina viva contra a brucelose. |
| Abstract: | Brucella abortus is a Gram-negative facultative intracellular pathogen that affects several domestic animals and occasionally man, causing brucellosis. Brucella LPS is one of the main virulence factors of this bacterium. Additionally, the wbkC gene product, the focus of this study, participates in LPS biosynthesis as a formyltransferase enzyme. Alterations in wbkC may cause modifications in LPS structure altering bacterial colony morphology from smooth (S) to rough (R). The main goal of this study was to inactivate the wbkC gene of the B. abortus wild type and vaccine strains in order to generate a new vaccine strain. Mutants B. abortus wbkC S2308 and B. abortus wbkC S19 were obtained by double homologous recombination. Characterization of these mutants was performed by PCR using specific primers. Southern blot confirmed that the wild type wbkC gene was disrupted within Brucella mutants. Morphology of mutant colonies presented rough phenotype demonstrated by crystal violet staining. Immunobloting analysis of Brucella mutants was performed and their LPS were recognized by rough LPS specific monoclonal antibodies. Persistence of the mutants were studied in both murine models: IRF(-/-) and C57BL/6. Brucella wbkC mutants were shown to be less virulent than wild type and B. abortus S19 strains and similar phenotype to B. abortus RB51 strain. Regarding protective immunity, the mutant B. abortus wbkC S2308 strain was able to induce similar protection when compared to S19 and RB51 vaccine strains in IRF(-/-) mice. In conclusion, wbkC mutants were less virulent than the wild type and vaccine strains, but only B. abortus wbkC S2308 induced similar protection level as induced by the vaccine strains commercially available. This data suggests that B. abortus wbkC S2308 is a potential candidate for the development of a live vaccine against brucellosis. |
| Subject: | Enzima formiltransferase Bioquímica Brucella Brucella abortus |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8H8KWS |
| Issue Date: | 7-Aug-2006 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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