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http://hdl.handle.net/1843/ZMRO-8XDHKA| Type: | Tese de Doutorado |
| Title: | Estudo comparativo dos efeitos dos complexos de inclusão de Clorexidina em ciclodextrinas em células bacterianas e eucariotas. |
| Authors: | Karina Imaculada Rosa Teixeira |
| First Advisor: | Maria Esperanza Cortes Segura |
| First Co-advisor: | Ruben Dario Sinisterra Millan |
| metadata.dc.contributor.advisor-co2: | Maria José Alonso Fernandez |
| First Referee: | Tamara Lobaina Rodriguez |
| Second Referee: | Eliete Marçal Guimaraes Raso |
| Third Referee: | Celia Regina Moreira Lanza |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Jose Bento Alves |
| Abstract: | Esta tese tem como objetivo avaliar a interacao de complexos supramoleculares de clorexidina (CX): ciclodextrinas (Cd) com celulas eucarioticas e procarioticas. Para estudar melhor a influencia na atividade antimicrobiana da CX apos a adicao de £\-Cd, £]-Cd e Hp-£]-Cd , foram realizados estudos in vitro aumentando a razao molar da ciclodextrina . A capacidade dos compostos na solubilizacao de ergosterol tambem foi investigada. O tamanho das particulas e potencial zeta foram determinados por espectroscopia por correlacao de fotons e anemometria laser Doppler usando um Zetasizer 3000 HS. As nanoparticulas resultantes estavam na gama de tamanho de 265-1451 nm, e com potencial zeta variando de -2 a 18 mV. A associacao destes compostos conduziu a um aumento do tamanho das nanoparticulas (493-1451 nm), com alteracao significativa dos potenciais zeta apos a formacao dos complexos supramoleculares. Os testes de atividade antimicrobiana dos mostraram que complexos de CX: £\-Cd foram mais eficientes para inibir o crescimento de Ca; CX: £]-Cd para Aa e CX: Hp-£]-Cd para Sm. A analise revelou valores de solubilizacao do ergosterol mais elevados com complexos £\-Cd 1:3 e 1:4. Foram utilizados Ensaios de proliferacao de diferentes tipos celulares para avaliar citotoxicidade in vitro. Os complexos supramoleculares de Hp-£]-Cd foram os menos citotoxicos para fibroblastos quando comparados aos outros compostos e a clorexidina pura. Os complexos de Ñ-Cd mostraram maior toxicidade para osteoblastos e fibroblastos quando comparados aos complexos Hp-£]-Cd. Dentre os compostos testados para celulas Caco-2 os de Hp-£]-Cd foram mais citotoxicos porem nenhum dos grupos moutrou-se severamente citotoxico para estas celulas. Para estudar a influencia dos compostos testados no metabolismo de calcio foram realizados ensaios de fosfatase alcalina. Observou-se que ocorre uma inibicao severa na atividade desta enzima a 0,1% e cicldoextrinas puras £]-Cd e Hp-£]-Cd foram capazes de estimular a liberacao de fosfatase alcalina a 0,001%. Os efeitos dos complexos supramoleculares sobre o citoesqueleto e o fluxo de calcio intracelular foram estudados por microscopia de imunofluorescencia confocal. Observou-se que o tratamento com clorexidina afeta de forma intensa tanto o fluxo de calcio como a organizacao do citoesqueleto celular. Os efeitos foram mais leves para complexos de CX:£]-Cd 1:3 e 1:4. Hp-Ò-Cd foi capaz de estimular o fluxo de calcio intracelular quando comparada as demais ciclodextrinas e tambem aos complexos supramoleculares. Em geral, o Ñ-Cd, £]-Cd e Hp-Ò-Cd aumentam a atividade antimicrobiana da CX e apresentam efeitos especificos sobre celulas. Assim, a ciclodextrina proporcionar uma ferramenta unica para modular a quantidade de esterol nas membranas celulares e citotoxicidade de farmacos. Esta caracteristica pode ser utilizada para diferentes formulacoes com ciclodextrina destinadas favorecendo a atividade seletiva. |
| Abstract: | The current study was designed to assess the ability of chlorhexidine (CX): cyclodextrins (Cd) complexes to target specifically the eukaryotic and prokaryotic membrane. To further explore the influence of the addition of £\-Cd, £]-Cd and Hp-£]-Cd of the complexes in the specificity, invitro studies were conducted increasing cyclodextrin molar rate against oral pathogens and the solubilization of ergosterol was also investigated. The particles measurement and zeta potential were evaluate by by photon correlation spectroscopy and laser Doppler anemometry using aZetasizer 3000 HS. The resulting nanoparticles were in the size range of 265¡V1451 nm and showed a zeta potential ranging from -2 to +18 mV. The association of these compounds led to an variable increase of the size of the nanoparticles (493¡V1451 nm), with significantmodification of their zeta potentials. The antimicrobial activity of the complexes showed that CX:£\-Cd complex was more efficient to inhibit C.a; CX:£]-Cd for A.a and CX:Hp-£]-Cd for S.m. The ergosterol solubilization analysis revealed highest values with 1:3 and 1:4 £\-Cd complexes. The viability assays of different cells were used to assess in vitro cytotoxicity. The inclusion complexes also decreased selectively the cytotoxicity of CX been Ò- and Hp-£]-Cd less cytotoxic in a dose dependent manner in fibroblast than Ñ-Cd, whereas Hp-£]-Cd inclusion complexes had no effect to high cytotoxic effects on Caco-2 cells in a dose-dependent. To study the effects of these compounds in the calcium metabolism was performed an alkaline phosphates assay.Supramolecular complexes inhibited alkaline phosphatase delivery at 0.1%. Ò- and Hp-Ò-Cd increase the alkaline phosphatase delivery at 0.001%. In general the Ñ-, Ò- and Hp-Ò-Cd increase the CX antimicrobial activity and has specific-cells effect. The effects ofsupramolecular complex in the cellular cytoskelet and Calcium transient levels were studied by confocal immunofluorescense microscopy. The results show dramatic alterations in the both parameters for chlorhexidine control. The alterations caused by supramolecular complexes treatment decreasing in 1:3 and 1:4 molar ratio. Hp-£]-Cd showed the biggest concentration of calcium in the cells. Cyclodextrin provide a unique tool to modulate cellular cholesterol in membranes and cytotoxicity, this characteristic could be used for designed different formulations with cyclodextrin favoring a selective activity.The inclusion of chlorhexidine in cyclodextrin enhanced this antimicrobial effect and attenuated the cytotoxic effects. |
| Subject: | Antiinfecciosos Agentes bacterianos Clorexidina Citotoxinas Ciclodextrinas/uso terapêutico Odontologia |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/ZMRO-8XDHKA |
| Issue Date: | 4-Jun-2012 |
| Appears in Collections: | Teses de Doutorado |
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