Caracterização molecular de herpesvírus bovinos por análise da região codificadora da glicoproteína G
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Nelson Rodrigo da Silva Martins
Clarice Weis Arns
Maurilio Andrade Rocha
Clarice Weis Arns
Maurilio Andrade Rocha
Resumo
Foi padronizada uma técnica de PCR que amplifica parte da região codificadora da gG dos herpesvírus bovinos. A mesma foi capaz de detectar amostras padrão de BoHV-1.1 (Colorado ATCC 864), BoHV-1.2 (K22) e BoHV-5 (EVI-88). O teste mostrou-se também eficiente em amplificar seqüências do gene codificador de gG de BoHV em amostras clínicas provenientes de sêmen, SNC e swab nasal, após isolamento em cultivo celular. A especificidade do teste foi testada por restrição dos produtos da PCR com a enzima XhoI e também pelo seqüenciamento dos amplicons. A região trabalhada mostrou-se eficiente na separação de amostras de BoHV-1 e BoHV-5. Para a região estudada, e, nas condições trabalhadas, o ensaio da mobilidade deheteroduplex (HMA) não apresentou resultados satisfatórios na diferenciação das amostras. Foi descrito durante este trabalho um caso de co-infecção do Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) e BoHV-5 em vacas de uma propriedade leiteira, no interior de Minas Gerais,evidenciando a necessidade de melhoria e disponibilização de testes diagnósticos eficientes em Medicina Veterinária. Este relato evidenciou também o envolvimento do Herpesvírus Bovino 5 em quadros respiratórios e em animais adultos em fase de lactação
Abstract
A semi-nested PCR was standardized to amplify the gG coding region of Bovine Herpesvirus (BpHV). This PCR was able to identify standard sample of BoHV-1.1 (Colorado ATCC 864), BoHV-1.2 (K22) and BoHV-5 (EVI-88). This test was also efficient in indentifying infection of cell cultures inoculated with material from semen, nasal swabs and central nervous system (CNS). The efficiency of the test was evaluated by restriction endonuclease assay with XhoI and by the amplicons sequencing. The genic region used showed to be efficient in identifying BoHV-1 and BoHV-5 in samples. For the regions and conditions used, the Heteroduplex Mobility Assay (HMA) showed to be unsatisfactory for differentiating subgroups. A co-infection of Bovine Syncytial Virus (BRSV) and BoHV-5 was detected in cows of a dairy farm. This report has alsoshowed BoHV-5 envolved in respiratory disorder in adult animals
Assunto
Bovino Doenças, Vírus do herpes em animais Diagnóstico, Glicoproteínas, Reação em cadeia de polimerase
Palavras-chave
BoHV 1, Co-infection, BoHV 12, BRSV, Sequencing, BoHV 5, PCR