Estudo da composição química e atividade anti-inflamatória da fração diclorometânica e subfrações de partes aéreas de Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltd. Micheli)
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltdl. Micheli, é uma planta popularmente conhecida como chapéu de couro. No Brasil, apresenta uso tradicional principalmente em doenças inflamatórias como artrite e gota. O principal objetivo do presente trabalho foi avaliar in vitro a inibição de mediadores pro- inflamatórios da fração diclorometânica e subfrações de E. grandiflorus, bem como investigar a composição química das frações ativas. O extrato etanólico das partes aéreas de E. grandiflorus foi dissolvido em água (40 mg/mL) e subsequentemente submetido a partição com solventes imiscíveis (n-hexano, diclorometano e acetato de etila). A fração diclorometânica (DCM) foi submetida à filtração utilizando-se como elemento filtrante a mistura de carvão ativado / celite (2:1), eluída sequencialmente com os seguintes solventes: metanol, acetona, diclorometano e n-hexano. As sub-frações metanólicas e acetônicas foram submetidas a subsequente purificação utilizando coluna empacotada com sílica gel e eluída sequencialmente com diclorometano, acetato de etila e metanol em diferentes proporções. A atividade das frações sobre a liberação de citocinas pró-inflamatórios (TNF-α e IL-1β) foram avaliadas in vitro em células THP-1 estimuladas por LPS. Empregando a dexametasona como controle positivo na concentração (0,1 µM por poço). Dentre as frações avaliadas, a fração diclorometânica foi a mais ativa reduzindo de forma significativa a liberação de ambos mediadores inflamatórios em células THP-1 estimuladas com LPS e não demonstrou citotoxicidade em nenhuma das concentrações avaliadas (10, 30, e 90 µg/mL). O fracionamento da sub-fração metanólica 1B em coluna cromatográfica empacotada com sílica gel levou a obtenção da sub-fração 63-66, que foi testada nas concentrações de 10 µg/mL e 30 µg/mL, e promoveu inibição significativa de TNF-α e IL-1β. A composição química da sub-fração supracitada foi investigada por métodos espectroscópicos usuais (IV, CG-MS, CLUE-MS-MS e RMN) e levou a identificação inequívoca do ácido palmítico (C16H32O2) como seu constituinte principal. Nossos resultados demonstram que Echinodorus grandiflorus é uma fonte de compostos bioativos com uso potencial no tratamento de doenças inflamatórias.
Abstract
Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltdl.) Micheli, popularly known as chapéu de
couro in Brazil, is a plant species traditionally used to treat inflammatory diseases such
as arthritis and gout. The main goal of this study was to evaluate in vitro the effect of
E. grandiflorus dichloromethane fraction and subfractions on the production of
inflammatory mediators, as well as to investigate the chemical composition of the
active fraction. The crude extract of E. grandiflorus aerial parts was dissolved in water
(40 mg/mL) and partitioned with dichloromethane. This fraction was filtered over active
charcoal / celite (2:1) by eluting with methanol, acetone, dichloromethane and nhexane. The methanol and acetone sub-fractions are further fractionated by silica gel
column chromatography eluted with dichloromethane / ethyl acetate / methanol in
different proportions. The effect of the fractions were evaluated in vitro on LPSstimulated THP-1 cells. And the dexamethasone (0,1 µM/per well) was employed as
positive control. Among the assayed fractions, dichloromethane fraction reduced more
significantly the release of both mediators by LPS-stimulated THP-1 cells and showed
no cytotoxicity at all tested concentrations (10, 30, and 90 µg/mL). Fractionation of
methanolic sub-fraction by silica gel column chromatography afforded the sub-fraction
63-66, which tested at 10 µg/mL and 30 µg/mL elicited similar inhibition of TNF-α; and
IL-1β release. The chemical composition of sub-fraction 63-66 was investigated by
spectroscopy analyses (IR, GC-MS, UPLC-MS-MS and NMR) and allowed the
identification of palmitic acid (C16H32O2) as its main constituent. Our findings point out
Echinodorus grandiflorus as a source of bioactive compounds potentially useful to treat
inflammatory diseases.
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Palavras-chave
Echinodorus grandiflorus, Ácido palmítico, Anti-inflamatório, IL-1 beta
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