Identificação de Mycobacterium bovis em leite através da reação em Cadeia da Polimerase - PCR
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Romulo Cerqueira Leite
Elvio Carlos Moreira
Elvio Carlos Moreira
Resumo
Desenvolveu-se um método simples para extração e identificação de DNA de Mycobacterium bovis em leite artificialmente contaminado. O método utiliza extração do DNA com fenol-clorofórrmio-álcoo1-isoamil e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), que permite através de síntese enzimática in vitro, a geração exponencial de seqüências gênicas específicas. Neste trabalho, comparou-se os perfis de amplificação com os conjuntos de iniciadores, TBI- TB2, BW6-BW7 e BW8-BW9, que produzem fragmentos de 383 bp, 306 bp e 248 bp. Usando este procedimento, foi detectado até 10² CFU/ml ou 5 pg de puro DNA. Este método pode ser usado na rotina de identificação de Mycobacterium bovis em amostras de leite.
Abstract
We developed a simple method for DNA extraction of Mycobacterium bovis in artificially infected milk to be used in diagnosis by the polymerase chain reaction (PCR). We compared the amplification pattem with set primers TBI-TB2 that yields a 383 bp fragment, set primers BW6-BW7 and BW8-BW9 that amplified a 306 bp and 248 bp, respectively. Set primers, BW6-BW7 and BW8-BW9 amplified iiagmerits present in six copies (IS1081) in strains of M bovis. Using this procedure, we detected until 102 CFU/ml or 5 pg of pure DNA. The method can be used for the routine diagnosis of Mycobacterium bavis in Milk samples.
Assunto
Leite Inspeção, Engenharia genetica, Micobacterias Identificação
Palavras-chave
leite, diagnóstico de Mycobacterium bovis, PCR