Caracterização cinética da protease trômbica presente no veneno de "Bothrops leucurus": leucurobina.
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Eladio Oswaldo Flores Sanchez
Roberto Goncalves Junqueira
Roberto Goncalves Junqueira
Resumo
Neste trabalho foram obtidos mais dados sobre a leucurobina, enzimasemelhante à trombina presente no veneno de Bothrops leucurus, serpente muito comum no Nordeste brasileiro. Foram determinados parâmetros cinéticos (KM, kcat, kcat/KM) sobre diversos substratos cromogênicos do tipo peptidil-pNA. Além disto foi avaliada a atividade coagulante da leucurobina sobre plasma humano e sobre fibrinogênio bovino purificado. A leucurobina apresentou atividade amidásica sobresubstratos contendo um resíduo de Arg em P1. O melhor substrato cromogênico testado foi D-Phe-L-Pro-L-Arg-pNA. A atividade amidásica da leucurobina sobre D-Phe-L-Pro-L-Arg-pNA foi inibida por sódio, potássio, cálcio e magnésio. A leucurobina apresentou forte atividade coagulante in vitro sobre plasma humano citratado e sobre fibrinogênio bovino purificado. A atividade coagulante sobre fibrinogênio bovino foi inibida na presença de sódio e potássio, mas não na presençade cálcio e magnésio. A fração glicídica da leucurobina nativa não interferiu na sua atividade amidásica nem na sua atividade coagulante in vitro.
Abstract
It was obtained in this work more data about leucurobin, a snake venom thrombin-like enzyme from Bothrops leucurus, very common in Brazilian Northeast. The kinetic parameters KM, kcat, kcat/KM over p-nitroanilin chromogenic substrates was determined. The coagulant activity over citrated human plasma and purified bovine fibrinogen was evaluated. Leucurobin has amidasic activity over substrates with LArg in P1 position. The best chromogenic substrate was D-Phe-L-Pro-L-Arg-pNA. The amidasic activity over D-Phe-L-Pro-L-Arg-pNA was inhibited in presence of Na+, K+, Ca+2 and Mg+2. Leucurobin has strong coagulant activity in vitro over citrated human plasma and purified bovine fibrinogen. The coagulant activity in vitro over bovine fibrinogen was inhibbited in presence of Na+ and K+, but not in presence of Ca+2 and Mg+2.
Assunto
Venenos, Química farmacêutica, Enzimas, Toxicologia, Farmácia, Sangue Coagulação
Palavras-chave
Caracterização cinética, Protease trombica, Substratos sintéticos, Coagulação, Bothrops leucurus