Estudo sobre os mecanismos antinociceptivos periféricos induzidos pelo peptideo natriuretico atrial em camundongos
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Resumo
RESUMO
INTRODUÇÃO: A dor é um fenômeno sensorial vital para a proteção dos tecidos e consequente sobrevivência do organismo. Como desempenha um papel tão importante, a dor, atualmente, é considerada o quinto sinal vital e está diretamente relacionada à qualidade de vida e bem estar do indivíduo, necessitando ser controlada em determinadas situações. Os estudos na área de controle da dor vêm aumentando, e novas moléculas têm sido estudadas. Sabe-se que o peptídeo natriurético utiliza a via de sinalização da guanitalo ciclase (GC), que culmina com a abertura de canais para potássio, evento esse que sabidamente constitui uma importante via de antinocicepção. OBJETIVO: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a ação antinociceptiva do PNA, a nível periférico, frente a hiperalgesia causada pela prostaglandina E2, investigando eventuais mecanismos de ação envolvendo as vias dos sistemas opioide, canabinoide, nitrérgico e dos canais para K+. MÉTODOS: Foi utilizado o teste de retirada de pata submetida à compressão mecânica em camundongos (Swiss, machos, 30-40 g, n = 5 / Protocolo CEUA: 157/2024). O estudo foi conduzido com o uso de ferramentas farmacológicas e, todos os fármacos foram administrados por via subcutânea na pata (intraplantar), no volume de 20 μl. RESULTADOS: A administração de PGE2 (2 μg/pata) diminuiu o limiar nociceptivo dos animais de forma eficiente. PNA (0,25; 0,5 e 1,0 μg/pata) promoveu efeito antinociceptivo, de forma dose- dependente, em animais pré tratados com PGE2. Esse efeito (PNA 1,0 μg/pata) foi revertido pelo antagonista seletivo dos receptores de PNA A71915 de maneira dose-dependente (2, 4 e 16 μg). Ocorreu reversão da antinocicepção também pelo antagonista não seletivo dos receptores opioides, Naloxona (50 μg/pata). Para avaliar qual ou quais receptores opioides específicos participavam do mecanismo, foram administrados os antagonistas seletivos do receptor μ, Clocxinamox (20 μg), δ, Naltrindole (60 μg) e κ, Nor BNI (200 μg); e obteve-se reversão completa da analgesia em todos os casos. A Bestatina (400 μg), inibidor da degradação de opioides endógenos, potencializou a antinocicepção da dose intermediária de PNA (0,5 μg). Na via canabinoidergica, houve reversão completa do efeito antinocipetivo com o uso dos antagonistas seletivos de receptores CB1 e CB2, AM251 (80 μg/pata) e AM630 (100 μg/pata), respectivamente. Houve potencialização da analgesia causada pela dose intermediária de PNA (0,5μg) com os inibidores das enzimas que participam da degradação e recaptação de endocanabinoides MAFP (0,5 μg), VDM11 (2,5 μg) e JZL184 (4 μg). O envolvimento do óxido nítrico (NO) também foi observado pela reversão da antinocicepção mediada pelo PNA quando utilizado o inibidor não seletivo das óxido nítrico sintases LNOarg (24
μg). Adicionalmente, para avaliar qual ou quais isoformas participavam do mecanismo, administrou-se LNIO (24 μg/pata), LNPA (24 μg/pata) e LNIL (24 μg/pata), inibidores seletivos da NOSe, NOSn e NOSi, respectivamente. A reversão da antinocicepção causada pelo PNA ocorreu com a inibição de duas isoformas, sendo total para a NOSn e parcial para NOSi, não havendo reversão da antinocicepção com a inibição da NOSe. A antinocicepção causada pelo PNA parece relacionar-se também com a abertura dos canais para K+, uma vez que o tetraetilamônio, bloqueador seletivo dos canais para K+ voltagem dependente (60 μg/pata) e os bloqueadores seletivos dos canais para K+ ativados por ATP, glibenclamida (160 μg/pata), ativados por Ca2+ de alta condutância, paxilina (40 μg/pata) e baixa condutância, dequalínio (50 μg/pata), foram capazes de reverter completamente a antinocicepção do PNA. CONCLUSÃO: O PNA possui efeito antinociceptivo periférico dependente de seu receptor de PNA, frente a dor aguda por PGE2. Foi demonstrado o envolvimento das vias opioide, canabinoide, NO e dos canais para potássio voltagem dependentes, ativados por ATP e os ativados por Ca2+ de baixa e alta condutância, no mecanismo antinociceptivo do PNA.
Abstract
NTRODUCTION: Pain is a vital sensory phenomenon for tissue protection and the
consequent survival of the organism. As it provides a crucial role, pain is currently
considered the fifth vital sign and is directly related to the quality of life and well-
being of the individual, requiring control in certain situations. Studies in the area of
pain control have been increasing, and new molecules have been studied. It is known
that natriuretic peptide uses the guanitalo cyclase (GC) signaling pathway, which
culminates in the opening of potassium channels, an event that is known to constitute
an important antinociceptive pathway. OBJECTIVE: The present study aimed to
evaluate the antinociceptive action of PNA, at a peripheral level, against
hyperalgesia caused by prostaglandin E2, investigating possible mechanisms of
action involving the pathways of the opioid, cannabinoid, nitrergic systems and K+
channels. METHODS: The paw withdrawal test subjected to mechanical
compression was used in mice (Swiss, males, 30-40 g, n = 5 / CEUA Protocol:
157/2024). The study was conducted using pharmacological tools and all drugs were
administered subcutaneously in the paw (intraplantar), in a volume of 20 μl.
RESULTS: The administration of PGE2 (2 μg/paw) efficiently decreased the
nociceptive threshold of the animals. PNA (0.25, 0.5 and 1.0 μg/paw) promoted an
antinociceptive effect, in a dose-dependent manner, in animals pretreated with
PGE2. This effect (PNA 1.0 μg/paw) was reversed by the selective PNA receptor
antagonist A71915 in a dose-dependent manner (2, 4 and 16 μg). Antinociception
was also reversed by the nonselective opioid receptor antagonist Naloxone (50
μg/paw). To evaluate which specific opioid receptor(s) participated in the
mechanism, the selective μ receptor antagonists Clocxinamox (20 μg), δ Naltrindole
(60 μg) and κ NorBNI (200 μg) were administered; and complete reversal of
analgesia was obtained in all cases. Bestatin (400 μg), an inhibitor of endogenous
opioid degradation, potentiated the antinociception of the intermediate dose of PNA
(0.5 μg). In the cannabinoid pathway, there was complete reversal of the
antinociceptive effect with the use of the selective CB1 and CB2 receptor
antagonists AM251 (80 μg/paw) and AM630 (100 μg/paw), respectively. There was
potentiation of analgesia caused by the intermediate dose of PNA (0.5 μg) with
inhibitors of enzymes involved in the degradation and reuptake of endocannabinoids
MAFP (0.5 μg), VDM11 (2.5 μg) and JZL184 (4 μg). The involvement of nitric oxide
(NO) was also observed by the reversal of PNA-mediated antinociception when the
non- selective inhibitor of nitric oxide synthases LNOarg (24 μg) was used.
Additionally, to evaluate which isoform(s) participated in the mechanism, LNIO
(24 μg/paw), LNPA (24 μg/paw) and LNIL (24 μg/paw), selective inhibitors of
eNOS, nNOS and iNOS, respectively, were administered. The reversal of
antinociception caused by PNA occurred with the inhibition of two isoforms, being
total for nNOS and partial for iNOS, with no reversal of antinociception with the
inhibition of eNOS. The antinociception caused by PNA also appears to be related
to the opening of K+ channels, since tetraethylammonium, a selective blocker of
voltage-dependent K+ channels (60 μg/paw) and the selective blockers of ATP-
activated K+ channels, glibenclamide (160 μg/paw), activated by high-conductance
Ca2+, paxillin (40 μg/paw) and low-conductance, dequalinium (50 μg/paw), were
able to completely reverse the antinociception of PNA. CONCLUSION: PNA has a
peripheral antinociceptive effect dependent on its PNA receptor, against acute pain
by PGE2. The involvement of opioid, cannabinoid, NO pathways and voltage-
dependent potassium channels, activated by ATP and those activated by low and high
conductance Ca2+, in the antinociceptive mechanism of ANP has been
demonstrated.
Assunto
Farmacologia, Fator Natriurético Atrial, Analgésicos Opioides, Dor Aguda, Canabinoides, Óxido Nítrico, Canais de Potássio
Palavras-chave
peptídeo natriurético atrial, antinocicepção periférica, dor aguda, via opioidergica, via canabinoidergica, óxido nítrico, canais para potássio