Descrição da família de proteínas Loxtox e a identificação de um novo grupo de fosfolipases D na glândula de peçonha da aranha Loxosceles similis.

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Universidade Federal de Minas Gerais

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Tese de doutorado

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Adriano Monteiro de Castro Pimenta
Clara Guerra Duarte
Márcia Helena Borges
Marília Martins Melo

Resumo

Acidentes com aranhas Loxosceles (loxoscelismo) são um problema de saúde público reconhecido no Brasil. Entretanto a patofisiologia do loxoscelismo causada pela picada da aranha Loxosceles similis ainda não é bem compreendida. Neste trabalho foi realizado o sequenciamento de RNA (RNA-Seq) da glândula de peçonha da aranha L. similis para identificar e analisar os componentes chaves da peçonha, as fosfolipases D. As sequências foram alinhadas baseadas nos seus domínios clássicos e uma árvore filogenética foi construída. Nas análises de bioinformática, foram encontradas 23 sequências completas de fosfolipases D e estas foram então classificadas como proteínas Loxtox, uma vez que elas continham o sítio ativo característico, o domínio de ligação ao magnésio e a alça catalítica. Três sequências de fosfolipases D que apresentaram domínios não canônicos também foram identificadas neste trabalho. Elas foram analisadas separadamente e foram nomeadas Fosfolipases D de L. similis (do inglês PhosphoLipase D - L. similis PLD-Ls) Este estudo é o primeiro a caracterizar sequências de fosfolipases D de aranhas Loxosceles por RNA-seq. Foram ainda analisados o perfil de expressão de outros possíveis componentes da peçonha, como proteases, outras fosfolipases e toxinas inseticidas. Os resultados contribuem para o conhecimento da composição da peçonha além de revelar novas possíveis ferramentas para uso farmacológico, imunológico e aplicações biotecnológicas.

Abstract

Spider bites from the Loxosceles genus (loxoscelismo) are a recognized public health problem in Brazil. However, the pathophysiology of loxoscelism caused by the Loxosceles similis species is not fully comprehended. In this work the RNA sequencing (RNA-seq) from the venom gland of the L. similis spider was performed, looking for identifying and analyzing the main components of the venom, the phospholipases D. The sequences were aligned based on their classical domains and a phylogenetic tree was constructed. During the bioinformatics analysis, 23 complete sequences of phospholipases D were found and they were classified as Loxtox proteins, since they presented the typical catalytic site, Mg2+-binding domain and the catalytic loop. Three phospholipases D sequences did not present the typical domains and were also identified in this work. They were analyzed separately and named Phospholipases D from L. similis (PhosphoLipase D - L. similis: PLD-Ls). There was also an analysis on the expression profile of other putative venom components such as proteases, other phospholipases and insecticidal peptides. This study is the first to characterize sequences from phospholipases D from Loxosceles spiders through RNA-seq. These results contribute to a better understanding of the venom and can yet reveal novel tools for immunological and biotechnological applications.

Assunto

Fisiologia, Aranhas, Venenos de aranha, Fosfolipases, Aranha marrom reclusa

Palavras-chave

Fisiologia e Farmacologia

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