Estudo bioquímicos e imunológicos das proteínas Pb28 e Pb 27r do fungo Paracoccidioídes brasiliensis
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Celia Maria de Almeida Soares
Adriano Monteiro de Castro Pimenta
Patricia Silva Cisalpino
Marcelo Torres Bozza
Adriano Monteiro de Castro Pimenta
Patricia Silva Cisalpino
Marcelo Torres Bozza
Resumo
Aparacoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica, granulomatosa eendêmica da América Latina, cujo agente etiológico éo fungoParacoccidioides brasiliensis. O diagnóstico da infecção é,principalmente,realizado por biópsia do tecido acometido. Diversos pesquisadores têmvoltado sues esforços na tentativa de isolar antígenos capazes dediagnosticar, sorologicamente, pacientes comPCM, assimcomo desencadearuma resposta protetora à infecção. Oantígeno Mexo,obtido a partir daP. brasiliensis foicapaz deextração das proteínas extracelulares do fungodiscriminar pacientes comPCM de indivíduos não infectados comsensibilidade de 100%. Alémdisso, pacientes emtratamento diminuemounão mais reconhecemantígenos presentes no Mexo. Uma proteína de 28 kDa(Pb28), presente no Mexo,foireconhecida por100% dos soros de pacientescomPCM testados.Essa proteína se mostrou altamente específica àinfecção, não sendo reconhecida pornenhumdos soros depacientes cominfecções diversas testados. APb28 foipurificada porFPLC e HPLC e aseqüência de sua região N-terminaldeterminada. As análises de homologia esimilaridade embancos de dados demonstraramque a Pb28 corresponde a umP. brasiliensis. Utilizando a mesma estratégia de purificaçãonovo antígeno de sequenciamento da região N-terminal, uma outra proteína dtambémreconhecida por soro de pacientes comPCM, foiidentificada. Essaproteína foicaracterizada como sendo o antígeno de 27 kDa do fungo(U41503.1), até então uma proteína hipotética, e denominada de Pb27r. Aseqüência de DNAcodificadora para a proteína Pb27r foiamplificada, clonadexpressa emsistema de expressão pGEX-4T-2.Estudosimunológicos coma Pb27r purificada demonstraramque essa proteína éaltamente sensível(80,5%) e específica (100%) àPCM emensaios de ELISAcomsoros humanos. Ela ainda foicapaz de induzir resposta imunológicaprotetora,comalta produção deIgG2b, emcamundongos Balb/C imunizadoscoma proteína e infectados como isolado virulento do fungo,Pb18. Estudosbioquímicos da Pb27r determinarama presença de 31,0% deestruturas -hélices;10,7% deestruturas folha-ß antiparalelas;9,0% deestruturas folha-ß paralelas ;17,3% deestruturas ß-Turn;32,4%de estruturas randômicas.Anticorpos Anti-Pb27r foramcapazes de localizar a proteína Pb27r nasuperfície do fungo.Esses resultados demonstramque ambas proteínas aquiestudas, Pb28 e Pb27r,têmcapacidade de discriminar pacientes comPCMpodendo serutilizadas emensaios de imunodiagnóstico e, a Pb27r podetambémser usada na confecção de vacina contrao fungo.
Abstract
Assunto
Bioquímica, Paracoccidioides brasiliensis
Palavras-chave
Paracoccidioides brasiliensis