Investigação da infecção por chikungunya virus em primatas não humanos no estado de Minas Gerais de 2017 a 2020 e adaptação de teste de neutralização viral utilizando tecido hepático
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Investigation of chikungunya virus infection in non-human primates in the state of Minas Gerais from 2017 to 2020 and adaptation of a viral neutralization test using liver tissue
Primeiro orientador
Membros da banca
Giliane de Souza Trindade
Pedro Augusto Alves
Pedro Augusto Alves
Resumo
O chikungunya virus (CHIKV) é o agente causador da febre chikungunya (CHIKF). A
introdução do vírus no Brasil ocorreu no ano de 2013 e um dos estados mais afetados por
casos de CHIKF foi Minas Gerais, que em 2017 apresentou grande incidência da doença. No
Brasil, o CHIKV é mantido na natureza em um ciclo urbano que envolve o Aedes aegypti e
hospedeiros humanos. Na África é observado também o ciclo silvestre do vírus, que envolve
mosquitos do gênero Aedes e os primatas não humanos (PNH) como hospedeiros. Ainda não
foi descrita a circulação do CHIKV em ambientes silvestres no Brasil, porém existe o risco de
estabelecimento, visto a persistência da circulação viral em centros urbanos e a presença de
vetores competentes em ambientes periurbanos e rurais. Já foi descrita a detecção de
anticorpos neutralizantes contra CHIKV em amostras de PNH do nordeste do país, indicando
uma possível circulação desse vírus no hospedeiro silvestre. Dessa forma, o objetivo desse
trabalho é a investigação da circulação do CHIKV em PNH coletados no estado de Minas
Gerais de 2017 a 2020 e a otimização de teste de neutralização adaptado utilizando amostra
de tecido hepático. Para os testes moleculares, foi realizada a extração de RNA total de 407
amostras de fígado de PNH, que em seguida foram submetidas a RT-qPCR para detecção do
controle endógeno. Feito isso, quando realizada a RT-qPCR tendo como alvo o gene E1 do
CHIKV, as amostras testadas foram negativas. Para o teste de neutralização viral adaptado,
foram utilizadas amostras de fígados de camundongos C57BL/6 previamente infectados com
CHIKV (n=6) e de animais não infectados (mock) (n=6). Amostras do tecido hepático foram
maceradas, clarificadas e o homogenato usado para a investigação de anticorpos
neutralizantes. Quando comparados os resultados dos testes feitos com amostras de animais
mock e animais experimentalmente infectados, foi observada diferença significativa entre as
porcentagens de neutralização, indicando uma ação neutralizante anti-CHIKV em amostras
de animais infectados. Após isso, foram realizados os testes de neutralização viral adaptado
com homogenato de fígado de PNH coletados em Minas Gerais, em zona urbana, em 2017.
Das 25 amostras testadas, uma apresentou neutralização acima de 90% (diluição 1:20),
indicando a presença de anticorpos neutralizantes anti-CHIKV. A não detecção molecular do
CHIKV e a detecção de anticorpos anti-CHIKV nas amostras de PNH ressalta a importância
da vigilância epidemiológica e da utilização de outros métodos, como o sorológico, para uma
investigação mais completa. Dadas as limitações das técnicas moleculares, o teste de
neutralização adaptado pode contribuir para o melhor entendimento da circulação de CHIKV
em animais silvestres, em Minas Gerais
Abstract
The chikungunya virus (CHIKV) is the causative agent of chikungunya fever (CHIKF). The
virus was introduced into Brazil in 2013 and one of the states most affected by cases of
CHIKF was Minas Gerais, which had a high incidence of the disease in 2017. In Brazil,
CHIKV is maintained in the wild in an urban cycle involving Aedes aegypti and human hosts.
In Africa, in addition to the urban cycle, there is a wild cycle of the virus involving Aedes
mosquitoes and non-human primates (NHP) as hosts. The circulation of CHIKV in wild
environments in Brazil has not yet been described, but there is a risk of this cycle being
established, given that viral circulation persists in urban centers and that there are competent
vectors in peri-urban and rural environments. The detection of neutralizing antibodies against
CHIKV in PNH samples from the northeast of the country has already been described,
indicating a possible circulation of this virus in the wild host. Thus, the aim of this study is to
investigate the circulation of CHIKV in NHP collected in the state of Minas Gerais from
2017 to 2020 and also to optimize an adapted neutralization test using liver tissue samples.
For the molecular tests, total RNA was extracted from 407 liver samples from NHPs, which
were then subjected to RT-qPCR to detect the endogenous control. Once this was done, when
RT-qPCR was carried out targeting the CHIKV E1 gene, the samples tested were negative.
Samples of liver tissue were macerated, clarified and the homogenate used to investigate
neutralizing antibodies. When comparing the results of the tests carried out on samples from
mock and experimentally infected animals, a significant difference was observed between the
neutralization percentages, indicating anti-CHIKV neutralizing action in samples from
infected animals. After this, adapted viral neutralization tests were carried out with liver
homogenate from NHP collected in Minas Gerais, in urban areas, in 2017. Of the 25 samples
tested, one showed neutralization above 90% (1:20 dilution), indicating the presence of
neutralizing anti-CHIKV antibodies. The lack of molecular detection of CHIKV and the
detection of anti-CHIKV antibodies in NHP samples highlights the importance of
epidemiological surveillance and the use of other methods, such as serology, for a more
complete investigation. Given the limitations of molecular techniques, the adapted
neutralization test can contribute to a better understanding of the circulation of CHIKV in
wild animals in Minas Gerais.
Assunto
Microbiologia, Vírus Chikungunya, Primatas, Testes de Neutralização
Palavras-chave
Chikungunya virus, Primatas não humanos, Spillback