Variabilidade molecular e aAnálise filogeográfica de populações Brasileiras de Ancylostoma caninum.
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Guilherme Correia
Andrea Mara Macedo
Teofania Heloisa Dutra Amorim Vidigal
Ricardo Toshio Fujiwara
Andrea Mara Macedo
Teofania Heloisa Dutra Amorim Vidigal
Ricardo Toshio Fujiwara
Resumo
O Ancylostoma caninum (Ercolani, 1859) possui uma ampla distribuição geográfica, representando um risco para a saúde animal e humana. Além disso, representa um importante modelo de estudo para as demais espécies antropofílicas de ancilostomídeos. Presentemente, está sendo realizado um projeto para desenvolver uma vacina anti-ancilostomídeos o qual está sendo executado pelo Sabin Vaccine Institute em conjunto com a George Washington University / EUA e outras instituições. Considerando os grandes esforços e investimentos financeiros que estão sendo empregados na tentativa de se formular uma vacina contra ancilostomídeos, se faz necessário a implementação de projetos para estudar a variabilidade molecular e a diversidade e estrutura genética populacional destes patógenos. Este trabalho teve como objetivo investigar a estrutura genética e a variabilidade molecular de populações brasileiras de A. caninum, utilizando-se marcadores moleculares mitocondriais e nucleares, incluindo um gene codificante de uma proteína importante para estratégias imunoprofiláticas, a Ancylostoma secreted protein 2, Ac-ASP-2. Foram coletadas amostras de A. caninum em centros de controle de zoonoses de cinco localidades brasileiras: Belo Horizonte/MG (BH = 36 indivíduos), Campo Grande/MS (CG = 46 indivíduos), Curitiba/PR (CT = 35 indivíduos), Ribeirão Preto/SP (11 indivíduos) e São Luís/MA (49 indivíduos). Os vermes foram identificados morfologicamente e submetidos individualmente à extração de DNA. Posteriormente, avaliou-se a diversidade e estrutura genética de populações brasileiras de A. caninum utilizando o marcador mitocondrial citocromo c oxidase subunidade I (COI), marcadores nucleares conhecidos como espaços transcritos internos (ITS-1 e ITS-2) e microssatélites de DNA. Os níveis de diversidade molecular foram intermediários e constantes nas populações brasileiras de A. caninum. Os resultados revelaram ainda moderada diferenciação entre as populações avaliadas. Os dados obtidos com os marcadores ribossomais ITS-1 e ITS-2 se mostraram inadequados para o estudo de genética populacional em A. caninum devido ao baixo número de sítios polimórficos encontrados. Alguns fatores foram discutidos para explicar a estrutura genética observada nas populações brasileiras de A. caninum: (i) distância geográfica evitando o evento de panmixia entre as localidades avaliadas; (ii) fluxos gênicos parciais entre subpopulações amostradas, incluindo a influência de movimentos recentes de hospedeiros; (iii) a presença de subpopulações distintas geneticamente melhores adaptadas à diferentes hospedeiros e/ou a presença de espécies crípticas dentro de uma mesma localização geográfica; e (iv) outros eventos genéticos (por exemplo, deriva genética) ocorrendo independentemente em cada subpopulação. Além dos estudos de Biologia Populacional com marcadores neutros, um fragmento genômico do gene Ac-ASP-2 foi também seqüenciado utilizando-se os vermes das cinco localidades brasileiras amostradas. As análises reveleram um considerável polimorfismo nucleotídico. A maior parte da variabilidade foi encontrada nos íntrons devido a menor pressão seletiva destes segmentos. As regiões codificantes também revelaram polimorfismos nucleotídicos e aminoacídicos distribuídos de forma não homogênea entre os éxons avaliados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da ecologia, padrões de transmissão, desenvolvimento de resistência à drogas e desenvolvimento de vacinas contra ancilostomídeos.
Abstract
Assunto
Ancylostoma caninum, Ancylostoma, Genética de populações, Marcadores genéticos
Palavras-chave
microssatélites de DNA, sequenciamento de DNA, Biologia populacional, DNAr, marcadores mitocondriais, Ancilostomídeos