Ciclo de vesículas sinápticas com conteúdo reduzido em junção neuromuscular.
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Elizabeth Ribeiro da Silva
Ligia Araujo Naves Kushmerick
Ligia Araujo Naves Kushmerick
Resumo
A captação de neurotransmissores para o interior das vesículas sinápticas (VS) é um processo ativo, direcionado pelo gradiente próton eletroquímico, o qual é a soma de dois componentes: o gradiente de pH (?pH) e o potencial de membrana (??), gerado através da atividade da H+ V-ATPase. Neste trabalho, investigou-se os efeitos de drogas que alteram o preenchimento de VS com acetilcolina no ciclo sináptico. Junções neuromusculares de rã foram expostas à sonda fluorescente FM1-43, que permite uma visualização direta e dinâmica do ciclo sináptico. Este marcador consiste em uma molécula anfipática com uma cauda hidrofóbica que promove a ligação da sonda à membrana do terminal axonal. Após um estímulo despolarizante, a membrana marcada com FM1-43 é internalizada por endocitose compensatória de modo que os aglomerados vesiculares podem ser visualizados por meio de microscopia de fluorescência sob a forma de pontos fluorescentes. Estimulação adicional na ausência de FM1-43 permite acompanhar e mensurar a exocitose. Vesamicol, NH4Cl e metilamina, não interferiram de maneira significativa na marcação dos terminais sinápticos com FM1-43 durante estímulo despolarizante com KCl (60mM). Da mesma forma, a exocitose de VS não foi afetada pelas drogas. Logo, nossos resultados sugerem que VS com conteúdo reduzido de neurotransmissor são endocitadas, recicladas e exocitadas de maneira indistinguível daquelas VS com conteúdo quantal preservado. Os resultados obtidos com esta investigação dinâmica do ciclo sináptico poderão nortear abordagens celulares e moleculares que esclareçam como as drogas estudadas interferem com a maquinaria protéica que regula os passos de exocitose e endocitose de vesículas sinápticas.
Abstract
Assunto
Junção neuromuscular, Vesícula
Palavras-chave
Junção Neuromuscular, Vesículas Sinápticas