Purificação e caracterização cinética da calicreína tecidual do rato (rk1) com os inibidores da tripsina: benzamidina, 4-aminobenzamidina e 4-nitrobenzamidina, e estudo comparativo com dados da literatira para a inibição da tripsina
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Ricardo Jose Alves
Roberto Goncalves Junqueira
Edyr Rogana
Roberto Goncalves Junqueira
Edyr Rogana
Resumo
O presente estudo consiste em purificar e determinar as características cinéticas da calicreína tecidual do rato (rK1), para futuramente formular inibidores enzimáticos seletivos para as calicreínas humanas. A princípio sintetizou-se e caracterizou-se o composto 4-nitrobenzamidina. A seguir, purificou-se a rK1, pelas etapas: DEAE-Sepharose (cromatografia de troca iônica) e Sepharose-aprotinina (cromatografia de afinidade). O peso molecular e a pureza da rK1 foram determinados por cromatografia em coluna de Superose 12 HR em equipamento FPLC. Os estudos da cinética da calicreína tecidual do rato rK1 com o substrato Bz-Arg-Nan na ausência e na presença da benzamidina, 4- aminobenzamidina e 4-nitrobenzamidina indicaram que a BzA é um inibidor competitivo enquanto que a ABzA e NBzA parecem ser inibidores do tipo misto
Abstract
The present study is to purify and determine the kineticcharacteristics of the tissue calicreína mouse (rK1) to further developselective enzyme inhibitors for human calicreínas. The principle issummed up and characterized the compound 4-nitrobenzamidina. Next,purified to rK1 by steps: DEAE-Sepharose (ion-exchangechromatography) and aprotinin-Sepharose (affinity chromatography). Themolecular weight and purity of rK1 were determined by chromatographyon a column of Superose 12 HR FPLC equipment.Studies of kinetics of tissue calicreína mouse rK1 with the substrate Bz-Arg-Nan in the absence and presence of benzamidina, 4-aminobenzamidina and 4-nitrobenzamidina indicated that BzA is acompetitive inhibitor while ABzA and NBzA inhibitors appear to bemixed-type
Assunto
Bioquímica, Inibidores enzimáticos, Farmácia
Palavras-chave
Inbidores da tripsina, 4-nitrobenzamidina, Caracterização cinética, Calicreína tecidual do rato, 4-aminobenzamidina, Benzmidina