Otimização de produção, purificação e caracterização parcial de lipases produzidas pela levedura Moniliella spathulata R25L270
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Autor(es)
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Vera Lucia dos Santos
Carlos Edmundo Salas Bravo
Roberto Gonçalves Junqueira
Gecernir Colen
Carlos Edmundo Salas Bravo
Roberto Gonçalves Junqueira
Gecernir Colen
Resumo
Neste trabalho foram estudadas as principais variáveis e seus níveis que influenciam na produção da(s) lipase(s) de Moniliella spathulata R25L270, além da purificação cromatográfica parcial desta(s) enzima(s) e caracterização das frações recolhidas. Sendo assim, executou-se um planejamento fatorial de níveis mistos L18, seguido de dois planejamentos fatoriais completos (23+1) de um meio de cultura contendo 0,1% de peptona, 0,02% de NaNO3 e uma das duas fontes de carbono (glicerol ou óleo de oliva). Percebeu-se que para glicerol como fonte de carbono, as variáveis [C], pH, PO4 proporcionaram melhores condições de produção da enzima nas concentrações de 9,0%, 6,5 e 0,1% respectivamente. Para a otimização com o óleo de oliva foi encontrada a melhor condição nas concentrações de 6,5 e 0,1% das variáveis pH e PO4 respectivamente. Notou-se também que as fontes de carbono modificavam o padrão de produção das enzimas. A melhor condição de purificação foi alcançada empregando precipitação com sulfato de amônio, ultrafiltração em sistema Amicon® e cromatografia de gel filtração, que possibilitou o isolamento de dois pools de atividade obtidos, cada um, em uma distinta fração de saturação de sulfato de amônio. As frações obtidas a partir dos extratos de 60 e 80% de saturação obtiveram distintas atividades máximas para diferentes ésteres alquílicos de ácidos graxos, cátions, pH e temperaturas, indicativas da existência da produção de pelo menos duas diferentes lipases por Moniliella spathulata R25L270.
Abstract
In this work, the main variables and their levels that influence the production of lipase(s) of Moniliella spathulata R25L270 were studied, in addition to the chromatographic purification of these enzyme(s) and characterization of the fractions collected. Thus, it was executed a mixed level factorial design L18, followed by two full factorial designs (23+1) of a culture medium containing 0.1% peptone, 0.02% of NaNO3 and one of two carbon sources (glycerol or olive oil). It was realized that, for glycerol as a source of carbon, the variables [C], pH and PO4 provided the best conditions for enzyme production in concentrations of 9.0%, 6.5 and 0.1%, respectivelly. For the optimization with the olive oil it was found the best condition in concentrations of 6.5 and 0.1% of the variables pH and PO4 respectivelly. It was also noted that the carbon sources would modify the production of enzymes. The best condition of purification was reached using ammonium sulphate precipitation, ultrafiltration in Amicon® systems and and gel filtration chromatography that allowed the isolation of two activity pools, each in a distinct fraction of saturation ammonium sulfate. The fractions obtained from the extracts of 60 and 80% of saturation obtained maximum activities for different alkyl esters of fatty acids, cations, pH and temperature, a strong indication of the production of at least two different lipases by Moniliella spathulata R25L270.
Assunto
Bioquímica e imunologia
Palavras-chave
Bioquímica e Imunologia