Produção de espécies reativas de oxigênio e criosobrevivência de embriões bovinos pós-vitrificação
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Production of reactive oxygen species and cryosurvival of post-vitrification bovine embryos
Primeiro orientador
Membros da banca
Maria Clara Caldas Bussiere
Álan Maia Borges
Álan Maia Borges
Resumo
A reduzida taxa de sobrevivência alcançada após o aquecimento de embriões vitrificados representa um grande problema para a disseminação do uso da criopreservação. Nesse contexto, os objetivos do presente estudo foram: (1) investigar as concentrações de espécies reativas de oxigênio e a geração de estresse oxidativo em blastocistos frescos e vitrificados aquecidos e (2) se a atenuação do estresse oxidativo, por meio do cultivo pós-aquecimento com (+) e sem (-) beta-mercaptoetanol (100 μM), poderia melhorar a sobrevivência (reexpansão e eclosão), o índice oxidativo e a qualidade de embriões vitrificados. No experimento I, os embriões foram segregados em dois grupos: embriões frescos (F) e embriões vitrificados aquecidos (V). No experimento II, os blastocistos frescos e vitrificados foram segregados em quatro grupos experimentais: fresco cultivado com antioxidante (F+), fresco cultivado sem antioxidante (F-), vitrificado aquecido cultivado com antioxidante (V+) e vitrificado aquecido cultivado sem antioxidante (V-). Os resultados mostraram que as concentrações de espécies reativas de oxigênio foram superiores (P<0,05) em embriões vitrificados (103,7±8,7 média de pixels) quando comparado aos embriões frescos (57,3±4,2 média de pixels). Por outro lado, a taxa de reexpansão dos embriões V+ e V- foi semelhante (P>0,05) em todos os momentos avaliados (0 h: V+ = 63,9%, V- = 62,6%; 2 h: V+ = 90,4%, V- = 95,6%; 4 h: V+ = 92,8%, V- = 98,9%). A taxa de eclosão dos embriões V+ (49,4%) e V- (48,1%) foi semelhante (P>0,05) àquela observada em embriões F- (65,7%). O índice oxidativo presente nos embriões também não diferiu entre os grupos experimentais (P>0,05). No entanto, os embriões V+ (148,0±7,3) apresentaram número total de células similar aos embriões F- (158,0±14,5) e F+ (163,2 ± 9,2), ao passo que embriões V- (117,4 ± 5,5) apresentaram menor (P<0,05) número de células em comparação aos demais grupos experimentais. Conclui-se que a vitrificação e o aquecimento elevam as concentrações de espécies reativas de oxigênio em embriões vitrificados e que, embora a atenuação do estresse oxidativo com beta-mercaptoetanol não tenha resultado em melhores taxas de sobrevivência embrionária, contribuiu para melhorar o número total de células, um indício de maior qualidade dos embriões vitrificados.
Abstract
The reduced survival rate achieved after warming vitrified embryos represents a major problem for the dissemination of the use of cryopreservation. In this context, the objectives of the present study were: (1) to investigate the concentrations of reactive oxygen species and the generation of oxidative stress in fresh and warmed vitrified blastocysts and (2) whether the attenuation of oxidative stress, through post-warming cultivation with (+) and without (-) beta-mercaptoethanol (100 μM), could improve survival (re-expansion and hatching), oxidative index and quality of vitrified embryos. In experiment I, embryos were separated into two groups: fresh embryos (F) and warmed vitrified embryos (V). In experiment II, fresh and vitrified blastocysts were separated into four experimental groups: fresh cultured with antioxidant (F+), fresh cultured without antioxidant (F-), warmed vitrified cultured with antioxidant (V+) and warmed vitrified cultured without antioxidant (V-). The results showed that the concentrations of reactive oxygen species were higher (P<0,05) in vitrified embryos (103,7±8,7 pixels mean) when compared to fresh embryos (57,3±4,2 pixels mean). On the other hand, the rate of re-expansion of the V+ and V- embryos was similar (P>0,05) in all evaluated moments (0 h: V+ = 63,9%, V- = 62,6%; 2 h: V+ = 90,4%, V- = 95,6%; 4 h: V+ = 92,8%, V- = 98,9%). The hatching rate of V+ (49,4%) and V- (48,1%) embryos was similar (P>0,05) to that observed in F- embryos (65.7%). The oxidative index present in the embryos also did not differ between the experimental groups (P>0,05). However, V+ embryos (148,0±7,3) showed a similar total number of cells to F- (158,0±14,5) and F+ (163,2±9,2) embryos, whereas embryos V- (117,4±5,5) had a smaller number of cells (P<0,05) compared to the other experimental groups. It is concluded that vitrification and warming increase the concentrations of reactive oxygen species in vitrified embryos and that, although the attenuation of oxidative stress with beta-mercaptoethanol did not result in better embryonic survival rates, it contributed to improve the total number of cells, an indication of higher quality of vitrified embryos.
Assunto
Ciência animal
Palavras-chave
Bovino, Reprodução animal, Criopreservação, Cultivo embrionário
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