Padronização dos ensaios para caracterização da população celular presente no líquido ascítico de pacientes com câncer epitelial de ovário atendidas no serviço de ginecologia oncológica do Hospital das Clínicas/UFMG
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Standardization of assays for cellular population characterization presents in the ascitic fluid of patients with ovarian epithelial cancer served at the oncological gynecology service of Hospital das Clínicas/UFMG
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Resumo
O câncer de ovário (CO) é a quinta maior causa de mortes de mulheres, por câncer, na América do Norte. No Brasil, segundo o INCA (Instituto Nacional do Câncer), a estimativa é de 6.150 novos casos para esse ano. Umas das dificuldades apresentadas no tratamento é a presença de ascite, normalmente associada a metástases e à doença refratária, o que é um sinal de mal prognóstico. O objetivo deste estudo foi padronizar métodos para isolar, cultivar e caracterizar subpopulações celulares presentes em amostras do líquido ascítico de pacientes com câncer de epitelial de ovário, atendidas no Serviço de Ginecologia e Obstetrícia do Hospital das Clínicas/UFMG (HCUFMG), como modelo para estudar mecanismos relacionados a quimioresistência e proliferação tumoral. Três pacientes foram incluídas no estudo e a análise microscópica mostrou grande quantidade e variabilidade celular. O cultivo primário das amostras foi estabelecido, com crescimento confluente das células no 5º dia. Diferentes ensaios foram realizados na tentativa de caracterizar essas células. O ensaio de imunofluorescência avaliou a presença das moléculas E/P caderina nestas células, que mostrou um resultado negativo, o que é indicativo da passagem das células para um fenótipo metastático ou indicativo da predominância de fibroblastos na placa. O citoesqueleto e núcleo celular também foram marcados para verificar preservação da morfologia dessas estruturas, que revelou núcleos e citoesqueletos irregulares e presença de células binucleadas. A avaliação da expressão de imunomarcadores relacionados às vias de transição epitélio mesenquimal e pluripotência, nas amostras de líquido ascítico das pacientes com CEO, por citometria de fluxo, não foi concluída, pois as células presentes nessas amostras não resistiram ao pré-preparo necessário para este ensaio e mostraram-se aglomeradas, o que impossibilitou a contagem. Estudos estão em andamento para otimização dos ensaios necessários para a caracterização fenotípica e imunofenotípica desse tipo de amostra.
Abstract
Ovarian cancer (OC) is the fifth cause of cancer deaths in North America. In Brazil, 6,150 new cases are estimated for this year according to INCA. One of the difficulties in OC treatment is the refractory disease, wherein the patients present disease progression and ascites. Ascites is associate to intraperitoneal metastasis and/or distant metastasis as results conditions patients normally have bad clinical outcome and poor prognosis. This study aimed standardize methods for isolate, culture and characterize subpopulations present in ascites from Epithelial Ovarian Cancer patients, as study model of tumor proliferation and resistance mechanisms. The samples of ascitic fluid were collected from three patients attended at the Gynecology Oncology Service of Hospital das Clínicas/UFMG (HC-UFMG). The primary cell culture was established, with confluent grow in fifth day. Many assays were done to attempt cell characterization. The immunofluorescence assay evaluated the E/P cadherin presence. The results showed negative expression of these molecules, which could mean passage of the cells through the epithelial-mesenchymal (EMT) transition process, phenomenon that contributes to the metastatic phenotype, or indicate fibroblast presence. In addition, the cytoskeleton and cell nucleus were marked to verify morphology preservation of these structures, which revealed an irregular cell nucleus and cytoskeleton and binuclear cells. The expression of imunomarkers related to the mesenchymal epithelial transition pathways and pluripotency in ascites samples of CEO patients by flow cytometry could not be done, because procedures and counting necessaries to this assay were prevented by formation of cell pellets. Studies are in progress to optimize assays for phenotype and imunophenotype characterization of this type of sample.
Assunto
Líquido ascítico, Carcinoma epitelial do ovário, Imunofluorescência, Imunofenotipagem, Citometria de fluxo
Palavras-chave
Líquido ascítico, Câncer epitelial de ovário, Cultivo primário, Imunofluorescência, Imunofenotipagem por citometria de fluxo
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