Improved performance of ELISA and immunochromatographic tests using a new chimeric A2-based protein for human visceral leishmaniasis diagnosis

Abstract

A leishmaniose visceral (LV) humana é um grande problema de saúde pública em todo o mundo, levando a taxas de mortalidade significativas se não for tratada e controlada adequadamente. A identificação precisa dos pacientes infectados é essencial para estabelecer medidas de tratamento e controle. Embora vários avanços no diagnóstico sorológico da LV tenham sido alcançados recentemente, principalmente usando antígenos recombinantes e testes imunocromatográficos (ICTs), melhorias ainda podem ser alcançadas usando proteínas quiméricas multiepítopos em diferentes plataformas de teste. Aqui, relatamos a avaliação do ELISA e de um ICT desenvolvido com uma nova proteína quimérica, denominada DTL-4, com base em sequências antigênicas repetitivas, incluindo aquelas presentes na proteína A2. Métodos. Um total de 1028 amostras de soro foram utilizadas para o desenvolvimento e validação do ELISA (321 amostras de pacientes infectados por L. infantum, 62 amostras de pacientes coinfectados por LV/AIDS, 236 amostras de pacientes infectados com outras doenças e 409 amostras de doadores saudáveis). Um total de 520 amostras de soro foram utilizadas para desenvolver e validar o ICT (249 amostras de pacientes infectados por L. infantum, 46 amostras de pacientes coinfectados por LV/AIDS, 40 amostras de pacientes infectados por outras doenças e 185 amostras de doadores saudáveis). Resultados. Usando os painéis de soros de validação, o ELISA baseado em DTL-4 apresentou uma sensibilidade geral de 94,61% (IC de 95%: 89,94-97,28), uma especificidade de 99,41% (IC de 95%: 96,39-99,99) e uma precisão de 97,02% (IC de 95%: 94,61-98,38), enquanto para ICT, os valores de sensibilidade, especificidade e precisão corresponderam a 91,98% (IC de 95%: 86,65-95,39), 100,00% (IC de 95%: 96,30-100,00) e 95,14% (IC de 95%: 91,62-97,15), respectivamente. Ao testar amostras de soros de pacientes coinfectados por LV/AIDS, o DTL-4-ELISA apresentou sensibilidade de 77,42% (IC de 95%: 65,48-86,16), especificidade de 99,41% (IC de 95%: 96,39-99,99) e precisão de 93,51% (IC de 95%: 89,49%-96,10%), enquanto para o DTL-4-ICT, a sensibilidade foi de 73,91% (IC de 95%: 59,74-84,40), especificidade de 90,63% (IC de 95%: 81,02-95,63) e precisão de 82,00% (IC de 95%: 73,63-90,91). Conclusão. O DTL-4 é um antígeno candidato promissor para sorodiagnóstico de pacientes com LV, incluindo aqueles com coinfecção por LV/AIDS, quando incorporado em formatos de teste ELISA.