Desenho, produção e caracterização de proteína multiepitópica recombinante para a produção de soro anti-Micrurus corallinus
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Flavio Almeida Amaral
Henrique Roman Ramos
Henrique Roman Ramos
Resumo
Parte dos acidentes ofídicos brasileiros é causada por cobras corais e o
tratamento específico é o Soro Antielapídico (SAEL), produzido contra o veneno
das espécies M. corallinus e M. frontalis. A disponibilidade da peçonha de M.
corallinus é escassa, impactando diretamente a cadeia de produção do SAEL no
país. Este trabalho visa definir, produzir e validar uma Proteína Multi-Epitópica
recombinante (PMEr-cor) como imunógeno alternativo para substituir, ao menos
em parte, o veneno de M. corallinus na produção do SAEL. Para atingir este
objetivo, foi construída uma sequência composta por epítopos previamente
validados e por novas sequências epitópicas mapeadas in silico das principais
toxinas do veneno de M. corallinus – Toxinas de três dígitos e Fosfolipases do
tipo A2. O gene que codifica este imunógeno foi clonado e transformado em
cepas de E. coli BL21DE3. A PMEr-cor foi expressa, purificada, caracterizada
imunoquimicamente e utilizada na imunização de coelhos. Um grupo de animais
foi inoculado com a PMER-cor para caracterização de seu potencial
imunogênico; outro grupo foi imunizado com a PMER-cor substituindo a peçonha
de M. corallinus, acrescida do veneno de M. frontalis; e no terceiro grupo foram
administrados os venenos brutos, simulando a produção do SAEL. Foi visto que
a PMER-cor é imunogênica, sem, no entanto, induzir proteção frente aos
venenos brutos de Micrurus sp quando utilizada sozinha. Já a caracterização do
soro produzido contra a PMEr-cor juntamente com o veneno de M. frotalis
demonstrou melhor desempenho preliminar em ensaios de neutralização da
ação do veneno in vitro e in vivo. Apesar de não ser eficaz como um imunógeno
substitutivo ao veneno de M. corallinus, após aperfeiçoamento da composição
de epítopos e espaçadores, a PMEr-cor poderia contribuir para a atualização
biotecnológica da cadeia de produção do SAEL.
Abstract
A part of Brazilian snakebites are caused by coral snakes and the specific
treatment against it is the use of Antielapidic antivenom (SAEL), produced against
the venom of the species M. corallinus and M. frontalis. The availability of M.
corallinus venom is low, which impacts directly the SAEL production chain in
Brazil. This work aims to design, produce and validate a recombinant Multi-
Epitopic Protein (PMEr-cor) as an alternative immunogen to replace, at least in
part, M. corallinus venom in the production of SAEL. To achieve this goal, a
sequence composed of previously validated epitopes, including new epitopic
sequences mapped in silico of the main toxins of M. corallinus venom (Three-
digit toxins and Phospholipases of type A2), was constructed. The gene encoding
this immunogen was cloned and transformed into E. coli BL21DE3. PMEr-cor
was expressed, purified, immunochemically characterized and used to immunize
rabbits. A group of animals was inoculated with PMER-cor to characterize its
immunogenic potential; another group was immunized with PMER-cor replacing
M. corallinus venom, added to M. frontalis venom; and in the third group, the
crude venom of the two species were administered, simulating the production of
SAEL. As a result, PMER-cor was proven immunogenic, yet without inducing
protection against the crude Micrurus sp venoms when used alone. The
characterization of the antibodies produced against PMEr-cor together with M.
frontalis venom demonstrated better preliminary performance in neutralization
assays of the in vitro and in vivo venom's action. Although PMER-cor has
notproven to be effective as a substitute immunogen for M. corallinus venom,
after improving the composition of epitopes and spacers used, it could contribute
to the biotechnological update of the SAEL production chain.
Assunto
Bioquímica e imunologia, Antivenenos, Cobras Corais, Epitopos
Palavras-chave
antiveneno, Micrurus corallinus, proteina mulltiepitópica