Avaliação da instabilidade genômica e disfunções celulares em fenótipos de preferência pelo etanol com o Zebrafish
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Larissa Paola Rodrigues Venâncio
Luciana Karen Calábria
Maria Raquel Santos Carvalho
Érika Cristina Jorge
Luciana Karen Calábria
Maria Raquel Santos Carvalho
Érika Cristina Jorge
Resumo
O transtorno do uso do álcool é uma condição patológica que afeta milhares de pessoas em todo o mundo. Há uma relação entre alterações no padrão de encurtamento dos telômeros, estresse oxidativo, apoptose e o uso crônico de etanol. No entanto, muitos desses parâmetros ainda não foram elucidados em conjunto em modelo de exposição aguda e/ou considerando os aspectos individuais de preferência pelo etanol. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a instabilidade genômica e disfunções celulares nos fenótipos de preferência pelo etanol com o zebrafish adulto. Os animais foram submetidos ao paradigma comportamental de Preferência Condicionado a Lugar (Conditioned Place Preference), e distinguidos em 4 fenótipos em relação à preferência pelo etanol após uma única exposição (20 min): Leve, Pesado, Inflexível e Reforço Negativo. Após a eutanásia, o cérebro, o fígado e as brânquias foram dissecados e imediatamente congelados e mantidos a -80ºC. Para as análises moleculares foi feita a extração de DNA e RNA dos respectivos tecidos, o tamanho dos telômeros, o número de cópias de mtDNA e a quantificação dos transcritos dos genes bax e bcl2 foram realizados por qPCR. Para as avaliações das enzimas antioxidantes, os tecidos foram homogeneizados em tampão fosfato, e posteriormente determinado o potencial antioxidante total e a atividade das enzimas catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx). O encurtamento do telômero foi observado nos fenótipos Pesado, Inflexível e Reforço Negativo. O aumento dos transcritos do gene bax foi evidenciado no fenótipo Reforço Negativo. O aumento da atividade das enzimas antioxidantes foi evidenciado principalmente nos fenótipos Inflexível e Reforço Negativo. Os fenótipos Inflexível e Pesado apresentaram maior número de cópias de mtDNA. O conjunto de resultados demonstra que uma única exposição ao etanol altera significativamente os parâmetros analisados, sobretudo há o encurtamento de telômeros e aumento da atividade das enzimas antioxidantes nos fenótipos de preferência pelo etanol, principalmente no fenótipo Inflexível. No entanto, nenhum desses parâmetros se mostrou alterado no fenótipo Leve (exposto ao etanol, mas sem preferência), sugerindo que as bases moleculares relacionadas ao comportamento de preferência pelo etanol vão além dos seus efeitos nocivos, apresentando uma forte relação com o perfil do fenótipo.
Abstract
Assunto
Genética, Etanol, Telômero, Apoptose, Peixe-zebra, DNA mitocondrial
Palavras-chave
Álcool, Telômeros, Enzimas antioxidantes, mtDNA, Apoptose, Danio rerio