ELISA competitivo para detecção de imunoglobina antiprototoxina epsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Zelia Ines Portela Lobato
Andrey Pereira Lage
Luiz Guilherme Dias Heneine
Vera Lucia Viegas de Abreu
Andrey Pereira Lage
Luiz Guilherme Dias Heneine
Vera Lucia Viegas de Abreu
Resumo
Padronizou-se o ELISA competitivo para detecção de anticorpos contra a prototoxina épsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D como alternativa a substituir o método da soroneutralização em camundongos para testes de potência de vacinas. As placas foram sensibilizadas com a protoxina épsilon, purificada em coluna de DEAE Sepharose CL 6B equilibrada com tampão fosfato 0,01 M pH 7,2. Os soros testados pela capacidade de inibir a reação padroniza no ELISA entre a imunoglobulina de coelho e a protoxina espsilon . A potência do soro teste foi calculada a partir de uma curva padrão elaborada com o Padrão Internacional de imonoglobulina antiespsilon. Soros de bovinos, vacinados contra C. perfringens tipos C e D, foram testados pela sononeutralização em camundongos e pelo ELISA competitivo e o coeficiente de correlação foi 0,87. A aplicabilidade e repetição do teste foi mensurada utilizando uma curva padrão previamente elaborada utilizando soro testado em diferentes dias e então comparados com o teste de soroneutralização em camundongos. O coeficiente de correlação foi 0,94.
Abstract
Standardized the competitive ELISA to detect antibodies against epsilon prototoxins produced by Clostridium perfringens type D as an alternative to replace the method of neutralization in mice for potency testing of vaccines. The plates were sensitized with protoxines epsilon, purified on a column of DEAE - Sepharose CL 6B equilibrated with 0.01 M phosphate buffer pH 7.2. The sera tested by inhibiting the ability to standardize the ELISA reaction between immunoglobulin and rabbit protoxines espsilon. The power of the test serum was calculated from a standard curve prepared with the International Standard imonoglobulina antiespsilon. Sera from cattle vaccinated against C. perfringens types C and D were tested by sononeutralização in mice and by competitive ELISA and the correlation coefficient was 0.87. The applicability and repeatability of the test was measured using a standard curve previously prepared using serum tested on different days and compared with the neutralization test in mice. The correlation coefficient was 0.94.
Assunto
Teste imunoenzimático, Vacina veterinária, Clostridium perfringens
Palavras-chave
ELISA competitivo, Prototoxina epsilon, Clostridium perfringens