Amblyomma sculptum salivary protease inhibitors as potential anti-tick vaccines

Abstract

Amblyomma sculptum é o principal carrapato associado a picadas humanas no Brasil e o principal vetor da Rickettsia rickettsii, agente causador da forma mais grave da febre maculosa brasileira. Moléculas produzidas nas glândulas salivares estão diretamente relacionadas ao sucesso alimentar e competência vetorial. No presente estudo, identificamos sequências de proteínas salivares de A. sculptum que podem estar envolvidas na hematofagia e selecionamos três proteínas que passaram por caracterização funcional e avaliação como antígenos vacinais. Entre as três proteínas selecionadas, uma continha um domínio inibidor de tripsina pancreática Kunitz_bovine (denominada AsKunitz) e as outras duas pertenciam às famílias 8,9 kDa e cauda básica das proteínas salivares de carrapatos (denominadas As8.9kDa e AsBasicTail). A expressão do RNA mensageiro (mRNA) que codifica todas as três proteínas foi detectada nas larvas, ninfas e fêmeas em níveis basais em carrapatos não alimentados e os níveis de expressão aumentaram após o início da alimentação. As proteínas recombinantes rAs8.9kDa e rAsBasicTail inibiram a atividade enzimática do fator Xa, trombina e tripsina, enquanto rAsKunitz inibiu apenas a atividade da trombina. Todas as três proteínas recombinantes inibiram a hemólise das vias clássica e alternativa; esta é a primeira descrição de carrapatos das famílias Kunitz e 8,9kDa como inibidores da via clássica do complemento. A imunização de camundongos com proteínas recombinantes causou eficácia contra fêmeas de A. sculptum de 59,4% com imunização rAsBasicTail para mais de 85% com imunização com rAsKunitz e rAs8.9kDa. A mortalidade de ninfas alimentadas com camundongos imunizados atingiu 70-100%. Portanto, todas as três proteínas são potenciais antígenos com possibilidade de se tornarem uma nova ferramenta no controle de A. sculptum.