Efeito da modulação da via da esfingosina na resolução da resposta inflamatória induzida por lipopolissacarídeo (LPS)
Carregando...
Data
Autor(es)
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Resumo
A esfingosina, um importante esfingolipídio derivado da membrana plasmática,
exerce um papel fundamental em vários processos celulares, incluindo, proliferação
celular, angiogênese, envelhecimento e apoptose, No entanto, seu papel na resolução
da inflamação ainda não foi elucidado. Neste trabalho, nós propusemos avaliar o
papel da via da esfingosina no acúmulo e sobrevivência de neutrófilos na cavidade
pleural induzida por desafio com LPS e em neutrófilos humanos in vitro. Para isso,
camundongos (BALB/c machos) receberam uma injeção de LPS i.pl. (250
ng/cavidade) ou PBS (grupo controle). Primeiramente, a expressão dos receptores
específicos de esfingosina 1-fosfato (S1P) foi avaliada em neutrófilos recuperados da
cavidade pleural ou neutrófilos murinos isolados da medula óssea estimulados com
LPS in vitro por qPCR e western blot. Posteriormente, foi avaliado o efeito dos
tratamentos com inibidores da via da esfingosina (L-Cycloserine, DL-threo Dihydrosphingosine e CAY10621) bem como de antagonistas dos receptores de S1P
(FTY720, JTE013 e CAY10444) no acúmulo de neutrófilos na cavidade pleural. As
diferentes drogas foram administradas 4h após o desafio com LPS, tempo no qual já
havia um grande acúmulo de neutrófilos, as células do lavado pleural foram coletadas
4h depois. Além disso, analisamos o efeito da administração de S1P na cavidade
pleural com o objetivo de avaliar sua atividade inflamatória. Ensaios in vitro,
utilizando neutrófilos humanos, foram realizados para estudar o efeito das drogas na
apoptose deste tipo celular. Por fim, foi realizado um ensaio de eferocitose in vivo, a
fim de avaliar o efeito das drogas na atividade de macrófagos. O desafio com LPS,
tanto na cavidade pleural quanto nos neutrófilos in vitro induz um aumento da
expressão dos receptores S1PR1, S1PR2 e S1PR3. A inibição farmacológica da via da
esfingosina e os tratamentos com os antagonistas dos receptores de S1P diminuiu o
acúmulo de neutrófilos na cavidade pleural, aumentou a apoptose dos neutrófilos e
induziu a eferocitose no local da inflamação. O mesmo efeito foi observado em
ensaios utilizando neutrófilos humanos, onde ocorreu um aumento de apoptose dos
mesmos. Em conclusão, a inibição da via da esfingosina mostrou-se pró-apoptótica e
pró-eferocítica, podendo representar uma estratégia terapêutica pró-resolutiva para o
tratamento de inflamações neutrofílicas induzidas por LPS.
Abstract
Sphingosine, an important sphingolipid derived from plasma membrane, plays a
fundamental role in many cellular processes including cell proliferation, angiogenesis,
senescence and apoptosis. However its role to inflammation resolution remains
unclear. Here, was proposed to evaluate the role of sphingosine pathway on
neutrophil accumulation and survival in the pleural cavity of LPS-challenged mice
and in isolated human neutrophils. For this purpose, mice received i.pl. administration
of LPS (250 ng/cavity) or PBS. First, the expression of S1P receptors was evaluated
in the cells of pleura or murine neutrophils stimulated with LPS, by qPCR and
western blot. The next step we evaluated the effect of the treatments with sphingosine
pathway modulators such as the L-Cycloserine, DL-threo-Dihydrosphingosine
(DTD), CAY10621, CAY10444, FTY720 and JTE013 in the cells of pleura. Thus, the
drugs are efficient in decreased the number of neutrophil and increased the percentage
of apoptotic cells and phagocytosis of apoptotic cells (efferocytosis). Furthermore, we
analysed the effect of S1P administration in pleural cavity to observed inflammatory
activity. Human in vitro assay were performed to to study the drug’s effects in human
apoptosis. We performed efferocytosis in vivo assay. The LPS stimuli increased the
expression of S1PRs, in vitro and in vivo. The inhibition of S1P pathway and the
treatment with the antagonists of receptors are efficient in decreased the cells in the
pleural cavity, increased the neutrophils apoptosis and induced the efferocytosis in the
inflamed tissue. The same effect was observed in vitro assay, increased of human
apoptosis. The inhibition of S1P pathway and S1PRs showed a resolutive strategy.
Assunto
Biologia Celular, Lipopolissacarídeos, Esfingosina, Membrana Celular, Receptores de Lipopolissacarídeos, Inflamação
Palavras-chave
Esfingosina, Membrana plasmática, LPS, Inflamação
Citação
Departamento
Endereço externo
Avaliação
Revisão
Suplementado Por
Referenciado Por
Licença Creative Commons
Exceto quando indicado de outra forma, a licença deste item é descrita como Acesso Aberto