Vaccinia virus: padronização de técnica para imunodiagnóstico e estudo da resposta imune humoral de bovinos
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Fernanda Nobre Amaral Villani
Andrey Pereira Lage
Andrey Pereira Lage
Resumo
Este trabalho teve como objetivos padronizar e validar a técnica de imunoperoxidase em monocamada celular (IPMC) para detecção e quantificação de IgG contra o Vaccinia virus (VACV) em bovinos e estudar a resposta imune humoral (RIH) contra este patógeno em animais natural e experimentalmente infectados. A validação da IPMC foi realizada comparando os resultados da soroneutralização (SN) de 148 amostras de soro bovino e apresentou elevada acurácia, sensibilidade, especificidade e índice kappa de concordância. O teste de repetibilidade realizado em 32 soros bovinos positivos na SN apresentou alto coeficiente de correlação intraclasse. A IPMC foi sensível, específica e adequada para triagem do VACV. No estudo da RIH de vacas e seus bezerros naturalmente infectados pelo VACV verificou-se o pico de IgG e de anticorpos neutralizantes (AN) no primeiro mês de infecção, e detecção até um ano após a ocorrência de surtos. A RIH de vacas em lactação experimentalmente infectadas com o VACV-GP2 também foi monitorada, com avaliação diária dos animais e coleta de amostras de soro até o 60º dia após a infecção. Após este período, os animais foram divididos em dois grupos: reinfectado e imunossuprimido. A curva de AN, IgG total, IgG1 e IgG2 destes animais foi determinada e observou-se que a presença de anticorpos protegeu parcialmente as vacas reinfectadas da vaccínia bovina.
Abstract
The aims of this study were the standardization and validation of an immunoperoxidase monolayer assay (IPMA) for detection and quantification of IgG against Vaccinia virus (VACV) in cattle and to study the dynamics of the humoral immune response (HIR) against this pathogen in natural and experimentally infected bovines. The assay was validated by comparison with neutralization test (NT) results of 148 bovine serum samples; the results showed elevate accuracy, sensitivity, specificity and kappa index of agreement. Repeatability tests realized with 32 positive serum samples at the NT revealed high intraclass coefficient correlation. The IPMA was sensitive, specific and suitable for VACV screening. The study of HIR in VACV naturally infected cows and their calves demonstrated the peak of IgG and neutralizing antibodies (NA) in the first month of infection, with detection up to one year after the occurrence of outbreaks. The HIR of lactating cows experimentally infected with VACV-GP2 was also evaluated. The cows were monitored daily and serum samples were collected until the 60th day post infection. After this period, animals were separated in two treatment groups: re-infected and immunosuppressed. The curve of NA, IgG, IgG1 and IgG2 of these animals were determined. It was observed that the presence of antibodies partially protected reinfected cows against VACV.
Assunto
Bovino Doenças, Poxvírus, Anticorpos, Vaccinia
Palavras-chave
Poxvirus, Anticorpos, Vaccinia bovina