Estudo histológico, histoquímico e imuno-histoquímico da matriz extracelular (MEC) da pele de cães naturalmente infectados com Leishmania (Leishmania) infantum
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Resumo
A leishmaniose visceral canina (LVC), é uma doença sistêmica e crônica causada por Leishmania (Leishmania) infantum. Trata-se de uma zoonose de grande importância para a saúde pública e para a clínica veterinária, caracterizada por intenso processo inflamatório crônico e alterações teciduais associadas à presença do parasito. Nos cães, a pele é um dos principais locais de alojamento do parasita, desempenhando papel fundamental na manutenção da cadeia de transmissão. O presente estudo buscou investigar, as alterações da matriz extracelular (MEC) com ênfase na fibropoese na pele de orelha de cães naturalmente infectados, no processo da dermatite crônica. Avaliaram-se a carga parasitária, tecidual, a intensidade do infiltrado celular, perfil de macrófagos e remodelamento da matriz extracelular. Para isso, quarenta e seis amostras de pele de orelha (pina) de cães provenientes de duas áreas endêmicas distintas do municípios de João Pessoa (PB) e Januária (MG), Brasil foram submetidas a análises histológicas de rotina (HE), histoquímicas (análise da matriz extracelular - técnicas do PAS e Alcian Blue para identificação de polissacarídeos neutros e ácidos respectivamente; técnicas da prata amoniacal de Gomori e Picrosirius para tipificação do colágeno); e imuno- histoquímicas (caracterização de macrófagos M1 e M2). Uma grande variabilidade na intensidade da inflamação e na carga parasitária entre os animais infectados foi observada. Todavia, em geral, a intensidade do infiltrado inflamatório crônico (macrófagos, linfócitos e plasmócitos) foi diretamente proporcional ao parasitismo tecidual. A coloração da prata amoniacal revelou associação direta entre a carga parasitária e com a deposição de fibras colágenas, morfologicamente compatíveis ao colágeno tipo III, confirmando através da coloração de Picrosirius Red. De forma complementar, a coloração de Verhoeff evidenciou desorganização e rarefação das fibras elásticas nos casos com inflamação mais intensa, indicando comprometimento da elasticidade da pele em estágios mais avançados da infecção. Por outro lado, as técnicas de PAS e Alcian Blue não apresentaram relevância para distinguir diferentes intensidades de infecção. A imuno-marcação dos macrófagos M1 e M2 demonstrou maior expressão de macrófagos M2 (CD163 positivos) e de alfa-actina de músculo liso (α- SMA), (miofibroblastos positivos), o que sugeriu processo ativo de remodelamento e fibrose cutânea. Em conjunto, os achados contribuem para uma compreensão mais ampla da patogênese e para o entendimento das mudanças teciduais cutâneas associadas à LVC.
Abstract
Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a systemic and chronic disease caused by Leishmania (Leishmania) infantum. It is a zoonosis of great importance for both public health and veterinary clinical practice, characterized by an intense inflammatory process and tissue alterations associated with the presence of the parasite. In dogs, the skin is one of the main sites of parasite lodging, playing a crucial role in maintaining the transmission cycle.
This study aimed to investigate the alterations of the extracellular matrix (ECM), with an emphasis on fibrogenesis in the ear skin of naturally infected dogs, within the context of chronic dermatitis. The following parameters were evaluated: tissue parasite load, intensity of cellular infiltrate, macrophage profile, and ECM remodeling.
To achieve this, forty-six ear skin (pinna) samples from dogs in two distinct endemic areas— João Pessoa (PB) and Januária (MG), Brazil—were subjected to histological (H&E), histochemical (ECM analysis: PAS and Alcian Blue for identification of neutral and acidic polysaccharides, respectively; Gomori’s silver stain and Picrosirius Red for collagen typing), and immunohistochemical analyses (characterization of M1 and M2 macrophages).
A wide variability in inflammation intensity and parasite load among infected animals was observed. In general, the intensity of chronic inflammatory infiltrate (macrophages, lymphocytes, and plasma cells) was directly proportional to tissue parasitism. Gomori’s silver stain revealed a direct association between parasite load and deposition of collagen fibers morphologically compatible with type III collagen, confirmed by Picrosirius Red staining.
Additionally, Verhoeff’s stain showed disorganization and rarefaction of elastic fibers in cases with more intense inflammation, indicating compromised skin elasticity in advanced stages of infection. On the other hand, PAS and Alcian Blue stains were not useful in distinguishing between different intensities of infection.
Immunolabeling for M1 and M2 macrophages revealed a predominance of M2 macrophages (CD163-positive) and smooth muscle alpha-actin (α-SMA)-positive myofibroblasts, suggesting an active process of skin remodeling and fibrosis.
Altogether, the findings contribute to a broader understanding of pathogenesis and provide insights into the cutaneous tissue changes associated with CVL.
Assunto
Patologia, Leishmaniose Visceral, Dermatopatias, Cães, Colágeno, Fibrose
Palavras-chave
Leishmaniose visceral canina, dermatopatologia em cães, fibras reticulares, fibras elásticas, colágeno e fibrose